الانتقاء المناعي السلبي: طريقة لتنقية الخلايا البائية من خلايا الدم المحيطية أحادية النواة

تشمل خلايا الدم المحيطية أحادية النواة أو PBMCs الخلايا البائية والخلايا التائية والخلايا القاتلة الطبيعية أو الخلايا القاتلة الطبيعية والخلايا الوحيدة. تنتج الخلايا البائية جزيئات الغلوبولين المناعي لمحاربة العدوى. في سرطان الدم ، تتكاثر هذه الخلايا وتنتقل إلى أعضاء مختلفة.

لعزل الخلايا البائية ، ابدأ بتعليق PBMCs المعزولة. أضف خليط الأجسام المضادة الأولية الموجه ضد جزيئات سطح الخلية المحددة تسمى مجموعة التمايز أو CD. ترتبط الأجسام المضادة المحددة بجزيء CD-3 على الخلايا التائية ، وجزيء CD-14 على الخلايا الوحيدة ، وجزيء CD-16 على الخلايا القاتلة الطبيعية ، مما يترك الخلايا البائية غير مسماة.

بعد ذلك ، اغسل العينة لإزالة الأجسام المضادة غير المرتبطة. أضف الميكروبيدات المغناطيسية الثانوية المترافقة بالأجسام المضادة إلى العينة. ترتبط الأجسام المضادة الثانوية بمنطقة FC للأجسام المضادة الأولية المرتبطة بخلايا معينة. ضع الأنبوب الذي يحتوي على تعليق الخلية المسمى تحت تأثير المجال المغناطيسي. في الحقل ، تهاجر الخلايا المصنفة مغناطيسيا وترتبط بجدار الأنبوب ، مما يؤدي إلى الاختيار السلبي للخلايا غير المرغوب فيها. اجمع المادة الطافية التي تحتوي على الخلايا البائية المخصبة في أنبوب تجميع جديد.

في هذا البروتوكول ، سنقوم بإجراء اختيار مغناطيسي مناعي سلبي للخلايا البائية لسرطان الدم من PBMCs لمرضى ابيضاض الدم الليمفاوي المزمن.

تخلص من المادة الطافية وأعد تعليق 10 ملايين PBMCs في مليلتر واحد من المخزن المؤقت للعزل ، وهو PBS مع 0.1٪ BSA و 2 مللي مولار EDTA ، مع تعديل الرقم الهيدروجيني إلى 7.4. تحتاج الخلايا الليمفاوية CLL الآن إلى تنقية من مستحضرات PBMC. بعد ذلك ، أضف 10 ميكروغرام من الأجسام المضادة الأولية أحادية النسيلة للفأر المضادة ل CD-3 و CD-14 و CD-16 ، واحتضانها لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية.

بعد غسل الخلايا بمخزن العزل والطرد المركزي عند 500 مرة جم لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية ، أعد تعليق 10 ملايين PBMCs في 1 مليلتر من المخزن المؤقت للعزل. احتضان الخلايا المعلقة ب 100 ميكرولتر من الخرز المغناطيسي المغسول لمدة 30 دقيقة عند 4 درجات مئوية مع إعادة تعليق لطيف. بعد ذلك ، ضع الأنبوب في حامل المغناطيس لمدة دقيقتين وانقل المادة الطافية مع الخلايا غير المرتبطة إلى أنبوب جديد بماصة سعة 5 ملليلتر. بعد هذه الخطوة ، تكون الخلايا الليمفاوية CLL المنقاة جاهزة للاستخدام.