موسوعة JoVE للتجارب
Microbiology
0 مشاهدة • 2:39 دقيقة • September 26th, 2025
ابدأ بأجنة أسماك الزرد المخدرة المحقونة بالبكتيريا المسببة للأمراض المسمى بالفلورسنت ، إما بمفردها أو ممزوجة بالكريات المجهرية للمواد الحيوية ، لنمذجة العدوى المرتبطة بالمواد الحيوية في الجسم الحي.
ضع طبق بتري يحتوي على وسائط قاعدية مع مخدر على مسرح مجهر مضان استريو مزود بمرشحات مناسبة.
أضف محلول ميثيل السليلوز إلى الطبق لإنشاء وسط لزج يشل حركة الأجنة للتصوير.
انقل الأجنة الفردية إلى ميثيل السليلوز وقم بمحاذاة أفقيا ، مما يضمن رؤية موقع الحقن.
باستخدام مرشح المجال الساطع ، ركز على موقع الحقن لاستهداف المنطقة المصابة.
اضبط معلمات التصوير Z-stack واحصل على صور مضانة على أعماق مختلفة لالتقاط ديناميكيات العدوى في ثلاثة أبعاد.
باستخدام البرنامج ، قم بتحليل الصور الملتقطة بمرور الوقت لقياس شدة التألق ومراقبة التوزيع البكتيري.
يتيح هذا البروتوكول مقارنة مباشرة لتطور العدوى في الأجنة الحية مع وبدون التعرض للمواد الحيوية.
ضع طبق بتري مقاس 100 ملم يحتوي على وسط E3 مكمل ب 0.02٪ تريكائين على مرحلة مجهر مضان ستيريو ، وأضف 500 ميكرولتر من 2٪ ميثيل سلولوز إلى طبق بتري. لمراقبة تقدم العدوى عن طريق الفحص المجهري الفلوري ، قم بتجهيز مرشحات المجال الساطع والفلورسنت المناسبة ، وقم بمحاذاة الأجنة المصابة المخدرة أفقيا في بقعة من ميثيل السليلوز في طبق بتري.
استخدم مرشح المجال الساطع لتركيز الأنسجة المحقونة التالفة عند تكبير 160x. اضبط عمق Z-stack على 10 ميكرومتر وحجم الخطوة على خمسة ميكرومترات للسماح بتسجيل ثلاث صور متتالية. ثم قم بتصوير الأجنة الفردية في ظل إعدادات محسنة متطابقة بتكبير 160x.
استخدم المكون الإضافي ObjectJ في ImageJ لتحليل الصور.