تحريض تمايز ضمة الانحلال الباراهيموليكي إلى خلايا سرب

ابدأ بوسط أجار منصهر يدعم نمو البكتيريا.

أضف مخلب الحديد لاستنفاد الحديد الحر ، واستكمل الوسط بالكالسيوم.

صب الوسط في طبق ، واتركه يتجمد ، ثم جففه للتخلص من الرطوبة المتبقية.

خذ مزرعة مرق Vibrio parahaemolyticus ، وهي بكتيريا سوطية.

في الوسائط السائلة ، توجد البكتيريا في شكل سباح قصير على شكل قضيب مع سوط.

ضع المزرعة على اللوحة واتركها تجف لتعزيز ملامسة البكتيريا للسطح.

أغلق الطبق واحتضنه ، مما يسمح بتراكم المنتجات الثانوية الأيضية المتطايرة من البكتيريا.

يؤدي التلامس السطحي ، والحد من الحديد ، وتوافر الكالسيوم ، والمنتجات الثانوية المتراكمة إلى تحفيز التعبير الجيني ، مما يؤدي إلى التمايز إلى خلايا سرب ممدودة تحتوي على سوط جانبي ، مما يتيح الحركة عبر الأسطح الصلبة.

تتوسع الخلايا السربية إلى الخارج وتشكل توهجات سربا تتكون من خلايا متمايزة تماما ، مما يشير إلى التمايز الناجح.

لتحضير محلول أجار لصنع ألواح الاحتشاد ، قم بتعليق أربعة جرامات من ضخ القلب ، أو مسحوق H. I. agar ، و 100 مل من الماء المقطر المزدوج.

قم بغلي محلول H.I. agar بحذر في فرن الميكروويف ، ورج الزجاجة من وقت لآخر حتى يذوب المسحوق. قم بالأوتوكلاف لمحلول أجار على حرارة 121 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة ، ثم قم بتبريد محلول الأجار إلى 60 إلى 65 درجة مئوية مع التحريك المستمر. تتضمن الخطوة التالية التعامل مع 2 ، 2'-Bipyridyl ، وهو شديد السمية ، لذلك يجب ارتداء القفازات ونظارات السلامة.

أضف 2 ، 2'-بيبيريديل إلى تركيز نهائي يبلغ 50 ميكرومولار. أضف كلوريد الكالسيوم إلى تركيز نهائي يبلغ أربعة ملليمولار. تلقيح كمية صغيرة من خلايا V. paraheemolyticus من حافة مستعمرة واحدة إلى 5 ملليلتر من مرق LB.

احتضان المزرعة عند 37 درجة مئوية في حاضنة شاكر حتى تصل إلى كثافة بصرية عند 600 نانومتر من 0.8. يستغرق هذا عادة حوالي ساعتين إلى ثلاث ساعات. أثناء نمو مزرعة الخلايا ، قم بماصة 30 إلى 35 مل من محلول H. I. agar النهائي في طبق بتري دائري 150 ملم ، واترك الأجار يتصلب.

قبل اكتشاف مزرعة الخلية مباشرة ، جفف صفيحة الأجار في وضع مستقيم بغطاء مفتوح عند 37 درجة مئوية لمدة 10 دقائق على الأقل ، أو حتى تختفي أي بقايا سائلة ، ولكن ليس بعد الآن. ضع ميكرولتر واحد من ثقافة الخلايا في وسط صفيحة احتشاد H.I. agar واترك البقعة تجف. أغلق اللوحة بشريط بلاستيكي شفاف ، مع الحرص على تجنب تكون فقاعات الهواء والطيات على الشريط.

احتضن الطبق على حرارة 24 درجة مئوية طوال الليل. سيؤدي ذلك إلى تكوين مستعمرة سرب V. parahaemolyticus مع توهجات سرب تمتد من مركز المستعمرة ، كما هو موضح في مقطع فيديو الفاصل الزمني هذا.