موسوعة JoVE للتجارب
Microbiology
0 مشاهدة • 2:28 دقيقة • September 26th, 2025
ابدأ بمزرعة الإشريكية القولونية المعزولة من الأطفال حديثي الولادة المصابين بعدوى مجرى الدم.
جهاز طرد مركزي لحبيبات البكتيريا ، والتخلص من المادة الطافية ، وإعادة تعليق الحبيبات في وسط خال من المضادات الحيوية.
خذ صفيحة بها ملحق بئر يحتوي على طبقة أحادية للخلايا الظهارية المعوية.
قم بقياس المقاومة الكهربائية عبر طبقة الخلية باستخدام مسبار لتأكيد سلامة الطبقة الأحادية.
أضف المعلق البكتيري إلى الملحق واحتضنه.
تلتصق البكتيريا بالخلايا الظهارية ، ويتم استيعابها داخل الحويصلات ، ويتم نقلها عبر الخلايا إلى البئر السفلي عبر عملية تسمى عبور الكوات.
قياس المقاومة الكهربائية مرة أخرى ؛ تؤكد القيمة المستقرة طبقة أحادية سليمة أثناء انتقال الكريات.
انقل الملحق إلى بئر جديد واجمع الوسط من البئر السفلي السابق.
ضع الوسط الذي تم جمعه على صفيحة أجار واحتضان لتطوير المستعمرات البكتيرية.
عد المستعمرات لتحديد مدى الإشريكية القولونية عبر الحاجز الظهاري المعوي.
كل 30 دقيقة بعد التلقيح ، املأ الآبار الجديدة ب 500 ميكرولتر من الطب الصيني التقليدي بدون مضادات حيوية ، وانقل الحشوات إلى هذه الآبار الجديدة. اجمع الوسائط من بئر التجميع المستخدم لكل إدخال في أنبوب منفصل مسمى وضع الأنبوب على الثلج. أعد لوحة Transwell إلى الحاضنة بين النقاط الزمنية.
لكل إدراج ، اجمع بين الوسائط التي تم جمعها من نقاط زمنية مختلفة ودوامة لفترة وجيزة. قم بطلاء الوسائط المجمعة على ألواح مثقاب LB باستخدام طريقة تخفيف المسار لتحديد عدد البكتيريا العابرة للخلايا في أول ساعتين من التجربة. اجمع وسائل الإعلام في أربع وست ساعات.
بالإضافة إلى ذلك ، في غضون ست ساعات ، قم بتوصيل الوسائط من آبار التحكم. في ست ساعات ، قم بقياس وتسجيل TEER. بعد الحضانة طوال الليل ، عد المستعمرات البكتيرية يدويا على ألواح LB المخففة للجنير.