موسوعة JoVE للتجارب
Microbiology
0 مشاهدة • 2:46 دقيقة • September 26th, 2025
ابدأ بأنبوب يحتوي على بكتيريا متحركة تعبر عن بروتين الفلورسنت الأخضر.
باستخدام إبرة ، اكتشف البكتيريا على صفيحة أجار مغذية ناعمة لدراسة حركة سطح البكتيريا.
بعد ذلك ، اقلب اللوحة لمنع تكثيف الماء على سطح الأجار.
احتضن اللوحة للسماح للبكتيريا بالنمو.
مع تقدم الحضانة ، تستخدم البكتيريا سوطها لبدء الهجرة إلى الخارج من نقطة التلقيح.
بمجرد اكتمال الحضانة ، افتح الغطاء وضع اللوحة المقلوبة في نظام تصوير ، بحيث يكون جانب الأجار مواجها للكاشف البصري ، لضمان التصوير الدقيق.
ضع الغطاء المملوء بالماء فوق اللوحة. أغلقها للحفاظ على بيئة رطبة.
أغلق نظام التصوير وابدأ الحصول على الصور بفاصل زمني.
بمرور الوقت ، تولد الهجرة البكتيرية نتوءات خضراء تشبه الأصابع تسمى المحلاق. تمتد هذه الهياكل البكتيرية إلى الخارج من نقطة التلقيح المركزية ، مما يؤكد حركة سطح البكتيريا.
قم بتلقيح واحد إلى خمسة ميكرولتر من المزرعة الليلية فوق ألواح أجار السرب المجففة عن طريق وخز سطح أجار باستخدام عود أسنان معقم أو إبرة تلقيح سلكية ، اعتمادا على سلالة البكتيريا ، انقل ألواح فحص السرب إلى حاضنة بدرجة حرارة مضبوطة إما على 30 درجة مئوية أو 37 درجة مئوية أو 42 درجة مئوية. اقلب الألواح بحيث تتكثف الرطوبة الزائدة على غطاء اللوحة وليس على الأجار ، وقم بموازنة البكتيريا في درجات حرارة محددة لمدة ساعتين أو أربع ساعات قبل التصوير بفاصل زمني.
بعد ذلك ، انقل اللوحات إلى وحدة التصوير في الجسم الحي بحيث تكون البكتيريا الموجودة على سطح الأجار متجهة لأسفل نحو الكاميرا المقلوبة للوحدة. املأ جميع أغطية أطباق بتري بكمية صغيرة من الماء. ثم ضع كل غطاء بحيث يكون جانب الماء متجها لأعلى فوق ألواح الأجار المقلوبة.
داخل وحدة التصوير ، أغلق حاوية التصوير للحفاظ على مستوى رطوبة ثابت ، واضبط إعدادات التصوير لوحدة التصوير وابدأ التصوير بفاصل زمني لنشاط الاحتشاد. بعد التصوير في الوقت الفعلي ، يمكن تحليل ديناميكيات الاحتشاد للبكتيريا باستخدام تحليل الصور القياسي مثل الصورة J.