موسوعة JoVE للتجارب
Microbiology
0 مشاهدة • 2:14 دقيقة • September 26th, 2025
ابدأ بسلالة بكتيرية بحرية مضيئة بيولوجيا تحمل أوبرون اللمعان ، الذي يشفر اللوسيفيراز والإنزيمات اللازمة لتخليق الركيزة.
ضع الضغط على صفيحة أجار غنية بالمغذيات مكملة بمياه البحر الاصطناعية لتقليد الملوحة المحلية ودعم النمو.
احتضان للحصول على مستعمرات منفصلة ، ثم عزل وتلقيح مستعمرة واحدة في وسط سائل يحتوي على مياه البحر الاصطناعية.
احتضان مع التحريض لتعزيز النمو بين عشية وضحاها في المرحلة الأسية.
انقل حجما محددا من المزرعة الليلية إلى وسط طازج واحتضنه لزيادة كثافة البكتيريا.
مع توسع السكان ، تطلق البكتيريا محفزات ذاتية ، مما يشير إلى الجزيئات التي تتراكم وتنتشر في الخلايا ، حيث ترتبط بالمستقبلات داخل الخلايا ، مما ينشط مشغل اللمعان.
هذا التنشيط يحفز التعبير لوسيفيراز والتخليق الحيوي للركيزة.
يحفز Luciferase أكسدة الركيزة ، وينبعث منها ضوء أزرق وأخضر.
مراقبة ثقافة التلألؤ البيولوجي كمؤشر على تنشيط اللمعان وانبعاث الضوء في البكتيريا البحرية.
بعد تحضير الوسائط وفقا لبروتوكول النص ، قم بربط السلالات البكتيرية المضيئة بيولوجيا على ألواح أجار متوسطة من مياه البحر الاصطناعية ، واحتضانها عند 24 إلى 30 درجة مئوية طوال الليل.
قم بإعداد ثقافة طوال الليل عن طريق تلقيح 100 مل من وسط مياه البحر الاصطناعي بمستعمرة واحدة من اللوحة. ثم احتضن المزرعة عند 24 إلى 30 درجة مئوية و 120 دورة في الدقيقة بين عشية وضحاها. في اليوم التالي ، قم بتلقيح 800 مل من وسط مياه البحر الاصطناعي ب 8 ملليلتر من المزرعة الليلية.
احتضان الخلايا البكتيرية عند 24 إلى 30 درجة مئوية ، و 120 دورة في الدقيقة وراقب الخلايا حتى تبدأ في التألق.