موسوعة JoVE للتجارب
Microbiology
0 مشاهدة • 2:30 دقيقة • September 26th, 2025
ابدأ بالخلايا القولونية المانحة التي تحمل بلازميد F حيث يتم استبدال الجين المنقول بجين مقاوم للمضادات الحيوية.
تحتوي هذه الخلايا أيضا على بلازميد إنقاذ يشفر جين النقل المفقود.
خذ كميات متساوية من الخلايا المتلقية بكتريا قولونية مع جين مختلف لمقاومة المضادات الحيوية في الحمض النووي الخاص بها.
امزج كلتا المزارعين في وسائط مغذية خالية من المضادات الحيوية واحتضن دون اهتزاز.
يعبر بلازميد إنقاذ البكتيريا المانحة عن جين النقل ، مما يسمح للخلية المانحة ببناء F-pilus.
يشكل بيلوس جسرا بين خليتين ، مما يسمح بنقل البلازميد أحادي الاتجاه من المتبرع إلى المتلقي ، مكونا متقارن.
قم بتدوير الخليط لتعطيل أزواج التزاوج وضعه على الجليد لمنع المزيد من التزاوج.
ضع المزرعة على ألواح أجار تحتوي على مضادات حيوية قابلة للاختيار عبر الكونغاواجنت واحتضانها.
تبقى المترافق ، التي تحمل كلا من جينات مقاومة المضادات الحيوية ، على قيد الحياة وتشكل مستعمرات في وجود كلا المضادات الحيوية ، مما يؤكد نجاح نقل البلازميد F.
في نسخ مكررة ، اقتباس 100 ميكرولتر من الخلايا المانحة و 100 ميكرولتر من الخلايا المتلقية إلى 800 ميكرولتر من وسائط LB المعقمة لحجم إجمالي مليلتر واحد. اترك الخلايا تتزاوج عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة دون اهتزاز. بعد ساعة ، قم بدوامة الخلايا لمدة 30 ثانية لتعطيل أزواج التزاوج.
ثم ضع الخلايا على الجليد لمدة 10 دقائق لمنع المزيد من التزاوج.
اختر خلايا MC4100 المترافقة التي تؤوي pOX38-Tc chloramphenicol بالضربة القاضية عن طريق اكتشاف عشرة أضواء ميكرولتر من كل تخفيف على كل نصف من ألواح الأجار التي تحتوي على الستربتومايسين والكلورامفينيكول. كرر مع كلا الخليطين المكررين. ثم احتضن الأطباق طوال الليل عند 37 درجة مئوية.