تعطيل البكتيريا باستخدام أحادي النوكليوتيدات الفلافين المنشط بالضوء

ابدأ بتلقيح بكتيريا مسببة للأمراض في أنبوب يحتوي على وسط سائل.

احتضان لتعزيز تكاثر البكتيريا ، ثم نقل المزرعة إلى أنابيب جديدة.

قم بتدوير الخلايا إلى حبيبات وتخلص من المادة الطافية.

أعد تعليق الكريات البكتيرية في محاليل عازلة تحتوي على تركيزات متزايدة من أحادي النوكليوتيدات الفلافين (FMN) ، ومحسس للضوء ، ومحلول عازل بدون FMN ليكون بمثابة عنصر تحكم.

امزج محتويات الأنبوب جيدا وانقل المعلقات إلى أنابيب زجاجية.

تعريض الأنابيب للضوء المرئي لتنشيط FMN ضوئيا ، الذي يتفاعل مع الأكسجين الجزيئي لتوليد أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS).

يتلف ROS المكونات الخلوية البكتيرية ، وبالتالي يقلل من قابلية البكتيريا.

انقل عينة الاقتباس إلى وسائط صلبة ، ووزعها بالتساوي ، واحتضان للسماح للبكتيريا القابلة للحياة بالنمو في مستعمرات.

بعد الحضانة ، قم بتحديد المستعمرات وحساب النسبة المئوية للانخفاض في قابلية البقاء البكتيرية مقارنة بالتحكم لتقييم التأثير المعتمد على الجرعة ل FMN.

تلقيح مستعمرة من المكورات العنقودية الذهبية في 10 ملليلتر من مرق الليسوجين في أنبوب اختبار مغطى بالمسمار سعة 15 مل. قم بزراعة المزرعة عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة في شاكر. نقل 0.5 مل من المزرعة إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل.

قم بتخفيف المزرعة إلى كثافة بصرية تبلغ 0.5 إلى 600 نانومتر عن طريق إضافة الماء المعقم. ثم انقل 0.5 مل من المزرعة إلى أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل. جهاز طرد مركزي عند 14,000 جم لمدة 10 دقائق وصبب المادة الطافية.

أضف مليلترا واحدا من محلول FMN المخزنة إلى حبيبات الخلية والدوامة. للتحكم في الإشعاع ، أضف مليلترا واحدا من الفوسفات العازل. انقل مليلترا واحدا من محلول الخلايا البكتيرية الذي يحتوي على 30 ميكرومولار FMN ومخزن الفوسفات إلى أنابيب زجاجية.

ضعها للإشعاع تحت الضوء البنفسجي بسرعة 10 واط لكل متر مربع لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، انقل مليلترا واحدا من محلول الخلية البكتيرية يحتوي على 30 و 60 و 120 ميكرومولار FMN ومخزن فوسفات في أنابيب زجاجية. يشع بالضوء الأزرق لمدة 120 دقيقة عند 20 واط لكل متر مربع.

أيضا ، قم بإشعاع أنبوب يحتوي على مليلتر واحد من FMN 120 ميكرومولار لمدة 60 دقيقة. بعد التشعيع ، أضف 0.2 مل من محلول التفاعل على صفيحة لوريا أجار. انشر المحلول باستخدام قضيب زجاجي على شكل حرف L واحتضنه طوال الليل عند 37 درجة مئوية.

في اليوم التالي ، احسب عدد الصفائح القابلة للحياة ومعدل تعطيل المكورات العنقودية الذهبية.