فحص المستشعر الحيوي البكتيري للكشف عن الزئبق المتاح بيولوجيا في ظل الظروف اللاهوائية

ابدأ بإعداد فحص يحتوي على قوارير موضوعة داخل غرفة لاهوائية.

تحتوي كل قارورة على وسائط مكملة بنترات الصوديوم وأيونات الزئبق وتركيزات متفاوتة من كبريتات المغنيسيوم.

قم بتدوير الإعداد لخلط المكونات ، ثم احتضانها.

وأثناء الحضانة، تعزز كبريتات المغنيسيوم تكوين مجمعات الزئبق غير المتوفرة أحيائيا، مما يقلل من أيونات الزئبق الحرة والمتوفرة أحيائيا بطريقة تعتمد على التركيز.

بعد ذلك ، أضف أجهزة الاستشعار الحيوية المستحثة والبكتيريا المعدلة وراثيا التي تحمل البلازميد واخلطها.

يحتوي البلازميد على منظم نسخ مستجيب للزئبق ومحفز مرتبط بجين مراسل الفلورسنت.

في ظل الظروف اللاهوائية ، تستخدم البكتيريا النترات للتنفس.

تدخل أيونات الزئبق الحر إلى الخلايا ، وتربط منظم النسخ ، وتنشط الجين الفلوري ، مما ينتج عنه بروتينات فلورية.

انقل الحصص من كل قارورة إلى طبق متعدد الآبار.

باستخدام قارئ الألواح ، قم بقياس شدة التألق.

ويؤكد انخفاض التألق مع زيادة تركيزات كبريتات المغنيسيوم قدرة المستشعر الحيوي على اكتشاف التغيرات في الزئبق المتاح أحيائيا.

قبل البدء في التجربة ، تحقق من الشاشة اللاهوائية للتأكد من عدم وجود أكسجين في الغرفة اللاهوائية. صمم تخطيط اللوحة وفقا لقالب 96 بئرا. لإجراء تجارب في النسخ المكررة الفنية لثلاثة ، سيسمح ذلك ب 32 علاجا مختلفا ، والتي يتم تمثيلها بشكل أفضل بشبكة أربعة × ثمانية لإعداد القوارير.

قم بإعداد الشبكة أربعة × ثمانية وفقا لتخطيط لوحة الفحص. ثم ضع قوارير PTFE القياسية سعة 7 مليلتر في الدرج. يجب التعامل مع القوارير فقط عن طريق التلاعب بالجزء الخارجي من القارورة.

أضف حجم متوسط التعريض الضوئي إلى كل قارورة تتوافق مع كل علاج. إلى كل قارورة ، أضف الحجم المقابل للمتغير الكيميائي ليتم اختباره وفقا لتخطيط اللوحة. أضف الآن النترات إلى كل قارورة بحيث يكون التركيز النهائي 200 ميكرومولار.

استبعاد هذه الخطوة لفراغات معالجة المستشعر الحيوي التأسيسية.

لإضافة الزئبق إلى القوارير ، خذ أولا من أربعة إلى ثمانية مرق ميكرومولار ورجها جيدا. قم بتخفيف المحلول ووسط التعرض في قارورة PTFE سعة 7 ملليلتر بتركيز 100 إلى 250 نانومولار لعمل محلول زئبق عامل.

من حل العمل هذا ، أضف الزئبق إلى القوارير المطلوبة وفقا لتخطيط اللوحة. بعد إضافة الزئبق أو الكادميوم ، قم بهز اللوحة يدويا في حركة مدارية. ويمكن إيقاف التجربة مؤقتا الآن اعتمادا على الوقت اللازم للزئبق أو الكادميوم لتحديد حدوثه في المحلول.

عند استئناف التجربة، قم بتخزين المستشعر الحيوي للماصة برفق ذهابا وإيابا لضمان التجانس. ثم أضف 100 ميكرولتر من مخزون المستشعر الحيوي إلى كل قارورة ورج اللوحة يدويا كما كان من قبل. قم بتسخين قارئ اللوحة إلى 37 درجة مئوية وقم بإعداد تشغيل حركي لمدة عشر ساعات مع قراءات كل نقطتين من خمس إلى خمس دقائق.

اهتزاز مداري بين القراءات ، قم بإعداد الجري لأخذ قياسات التألق مع إثارة مضان تبلغ 440 نانومتر وانبعاث 500 نانومتر. الآن ماصة 200 ميكرولتر من كل قارورة PTFE في شبكة أربعة × ثمانية في الآبار المقابلة للوحة 96 بئرا.

الماصة ذهابا وإيابا خمس مرات قبل نقل كل 200 ميكرولتر. ضع اللوحة المكونة من 96 بئرا في صينية قارئ اللوحة. ثم ضع الغطاء على اللوحة المكونة من 96 بئرا وابدأ الفحص.