موسوعة JoVE للتجارب
Microbiology
0 مشاهدة • 2:47 دقيقة • October 30th, 2025
ابدأ بفأر تجريبي تم معالجته مسبقا بالبكتيريا المفيدة وفأر التحكم الذي يتم إعطاؤه محلول ملحي مخزن بالفوسفات أو PBS.
تعريض كلا الفئران لدرجات حرارة عالية للحث على الإجهاد الفسيولوجي.
في الفئران الضابطة ، يؤدي الإجهاد الحراري إلى تعطيل الحاجز الظهاري للأمعاء ، مما يسمح للبكتيريا المشتقة من الأمعاء بالانتقال والانتشار إلى الأعضاء الداخلية.
ومع ذلك ، في الفئران التجريبية ، تطلق البكتيريا المفيدة جزيئات إشارات تحافظ على الوصلات الظهارية وتقلل من انتقال البكتيريا.
خذ أنابيب تحتوي على عينات الكبد المحصودة من كل فأر.
أضف PBS وقم بتجانس العينات لإطلاق البكتيريا في المخزن المؤقت.
انشر المتجانس المخفف على ألواح أجار غنية بالمغذيات.
احتضان الألواح للسماح بتكوين المستعمرات البكتيرية. ثم عد المستعمرات.
يشير عدد المستعمرات الأعلى في عينة التحكم إلى اضطراب حاجز الأمعاء ونقل البكتيريا.
في المقابل ، يشير عدد أقل من المستعمرات في العينة التجريبية إلى تأثير البكتيريا المفيدة في الحد من انتقال البكتيريا إلى القناة الهضمية.
بعد علاج الفئران عن طريق التزقيم الفموي باستخدام B.subtilis BSB3 أو PBS لمدة يومين ، ثم تقسيم وقياس درجة حرارتها ، احتفظ بالفئران من المجموعتين الأولى والثانية في درجة حرارة الغرفة لمدة 25 دقيقة. ضع من المجموعتين الثالثة والرابعة في غرفة مناخية عند 45 درجة مئوية و 55٪ رطوبة نسبية لمدة 25 دقيقة.
بعد ذلك ، بعد القتل الرحيم للحيوانات ، وجمع دم الجذع ، وعزل الأعضاء وفقا لبروتوكول النص ، أضف PBS معقما إلى كل أنبوب للحصول على وزن واحد إلى عشرة وزن لكل حجم تخفيف للعينة ، واستخدام مجانس الأنسجة الزجاجية المعقمة لتوليد معلقات الأنسجة المتجانسة.
بعد ذلك ، استخدم PBS المعقمة لعمل تخفيفات تسلسلية لكل عينة. ثم ضع 0.1 مل من جميع المخففات على سطح ماكونكي و 5٪ أجار الدم ، وأجار دم البروسيلا مع الهيمين وفيتامين ك 1. بعد احتضان الألواح ، استخدم عداد مستعمرة لحساب المستعمرات على كل مجموعة من اللوحات.