تزامن ثقافة البكتيريا الزرقاء وضغط الحمض النووي مدفوع بدورات الضوء والظلام

ابدأ بطبق أجار غني بالمغذيات مكمل بثيوسلفات.

قم بربط البكتيريا الزرقاء واحتضان تحت فترات الضوء والظلام المتناوبة للحفاظ على الدورة اليومية.

خلال فترة الضوء ، يدعم امتصاص المغذيات وثيوسلفات نمو البكتيريا وتكثيف الحمض النووي.

في الفترة المظلمة ، تحافظ الخلايا على الطاقة وتنقسم.

تعمل دورة الضوء والظلام المتناوبة على مزامنة الخلايا مع نفس مرحلة النمو والانقسام.

بعد فترة الضوء ، أضف محلول السكروز والماصة بشكل متكرر لإطلاق البكتيريا الزرقاء ، مما يتسبب في تغير اللون. نقل الخلايا إلى أنبوب.

أضف صبغة فلورية خاصة بالحمض النووي واحتضن في الظلام. ترتبط الصبغة بالحمض النووي للبكتيريا الزرقاء.

جهاز طرد مركزي لفصل البكتيريا الزرقاء وإزالة المادة الطافية.

أعد تعليق البكتيريا الزرقاء في محلول السكروز ، وانقل المعلق إلى شريحة ، وقم بتغطيته.

تحت مجهر مضان ، يؤكد الحمض النووي الأزرق المكثف في الخلايا التقدم المتزامن والمنظم بالساعة البيولوجية لدورة الخلية البكتيرية الزرقاء.

ابدأ بزراعة البكتيريا الزرقاء على ألواح BG-11 المعقمة التي يبلغ طولها تسعة سنتيمترات تحتوي على 1.5٪ أجار و 0.3٪ ثيوسلفات الصوديوم. احتضان الصفائح عند 23 درجة مئوية تحت دورة ضوئية 12-12 مع 50 ميكرو من الضوء لكل متر مربع في الثانية. للحفاظ على الخلايا ، قم بنقلها إلى ألواح أجار BG-11 جديدة أسبوعيا.

في غضون أسبوع واحد ، تظهر الثقافات على شكل أشرطة خضراء. انقل كتل الخلايا الخضراء باستخدام حلقة معقمة باللهب ، وقم بوضعها على اللوحة الجديدة. لمراقبة ضغط الحمض النووي ، اجمع الخلايا المزروعة لمدة ستة أيام في نهاية فترة الضوء.

لتحرير الخلايا من الصفيحة ، أضف مليلتر واحد من السكروز 0.2 مولار. بعد ذلك ، اجمع معلق الخلية ، وكرر إضافة السكروز وإزالته حتى يتحول المحلول إلى اللون الأخضر. يشير تغيير اللون إلى أن معظم الخلايا قد تم إطلاقها.

الآن ، انقل 500 ميكرولتر من محلول الخلايا العالقة إلى أنبوب Microfuge ، وأضف صبغة Hoechst للحصول على تركيز نهائي يبلغ ميكروغرام واحد لكل مليلتر. ثم دع الخلايا تحتضن في الظلام لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، قم بتدوير الخلايا ، وتخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليقها في 10 ميكرولتر من السكروز 0.2 مولار.

بعد ذلك ، انقل ميكرولتر واحد من المعلق إلى شريحة زجاجية ، وقم بوضع زلة غطاء ، وراقب الخلايا تحت مجهر مضان مزود بفلتر للأشعة فوق البنفسجية. باستخدام هدف غمر الزيت 100 مرة ، ابحث عن دليل على ضغط الحمض النووي ، والذي يجب ملاحظته في معظم الخلايا.