اختبار فلوري عالي الإنتاجية لدراسة تفاعلات الميكروبات والدودة

ابدأ بأنبوب يحتوي على ديدان C. elegans .

انقل الديدان إلى صفيحة متعددة الآبار تحتوي على وسط أغروز غني بالمغذيات يحتوي إما على البكتيريا الضابطة أو البكتيريا التجريبية.

خلال الحضانة، تبتلع الديدان البكتيريا التي تستعمر ظهارة الأمعاء وتطلق الأحماض الأمينية التي تعمل كمصدر غذائي. يتم استقلاب هذه الأحماض الأمينية إلى مشتقات من الأحماض الأمينية وتخزن في حبيبات أمعاء مرتبطة بالليسوسوم.

بعد ذلك، أضف المحلول المؤقت الجديد وانقل الديدان إلى لوحة فحص متعددة الحفر السوداء.

أضف محفز إجهاد كيميائي لكل بئر وأغلق اللوحة.

ضع اللوحة في قارئ ألواح فلورية وسجل الفلورة.

في الديدان، يسبب محفز الإجهاد إجهادا تأكسديا، مما يضر خلايا الظهارة في الأمعاء.

هذا يتسبب في تمزق حبيبات الأمعاء المرتبطة بالليسوسوم، مما يطلق مشتقات الأحماض الأمينية، والتي عند تعرضها للأشعة فوق البنفسجية، تتوهج باللون الأزرق.

قارن فلورة الديدان المعرضة للمادة المضايدة واختبر البكتيريا لتقييم كفاءة استعمار البكتيريا وتأثيرها على استجابة المضيف للإجهاد التأكسدي.

اضبط تركيز الديدان إلى 15 دودة لكل ميكرولتر في أنبوب مخروطي بسعة 15 ملليتر. ثم نقل 8 ميكرولترات من محلول الدودة إلى كل من آبار صفائح أغاروز NGM ذات 96 بئر ثمانية باستخدام ماصة متعددة القنوات أو ماصة تكرارية.

بعد 36 ساعة، يتم صرف 30 ميكرولتر من M9 في كل بئر من صفيحة 96 بئرا. بعد ذلك، نقل الديدان إلى صفيحة 384 بئر وفقا لتخطيطات المجموعات باستخدام رؤوس تثبيت منخفضة، لضمان ضبط قارئات الألواح بشكل صحيح. بعد ذلك، قم بإضافة المزيد من M9 إلى ألواح 384 بئرا بذرة M9، مع الهدف من الوصول إلى حجم نهائي يبلغ 60 ميكرولتر لكل بئر بإضافة 40 ميكرولتر من M9 لاختبار الإجهاد الحراري و34 ميكرولتر من M9 في 6 ميكرولتر من TBHP للإجهاد التأكسدي الناتج عن TBHP.

ثم ابدأ الفحص خلال دقيقتين من إضافة TBHP. بعد ذلك، أغلق الألواح بغطاءها الشفاف، وأغلق حواف الألواح ذات 384 بئر بشريط لاصق، لضمان عدم تجاوز الشريط فوق الغطاء أو تحت اللوحة. ثم أدخل اللوحة في قارئ اللوحات.