موسوعة JoVE للتجارب
Microbiology
0 مشاهدة • 2:53 دقيقة • November 28th, 2025
ابدأ بجهاز ميكروفلويديك مثبت على مرحلة مجهر فلوري مقلوب.
يتكون الجهاز من شريحة بوليمر تحتوي على قنوات تغذية أفقية. كل قناة مبطنة بسلسلة من الخنادق الضيقة المغلقة من أحد الأطراف ومصممة لحصر الخلايا البكتيرية في سلاسل خطية.
داخل الخنادق توجد خلايا بكتيرية غير متحركة تعبر عن بروتين فلوري، مما يتيح لها التصور.
كل قناة تغذية متصلة بمضخات حقن توفر وسطا غنيا بالمغذيات بمعدل تدفق مضبوط.
ابدأ التدفق للسماح للوسط بالانتشار داخل الخنادق ودعم نمو البكتيريا.
تنقسم الخلايا البكتيرية المحصورة داخل الخندق، مكونة سلسلة من النسل.
يضمن تصميم الخندق غسل الخلايا الجديدة في الطرف المفتوح، مما يتيح تتبع الخلايا الأقدم على المدى الطويل.
التقط صورا للخنادق مع مرور الوقت لتتبع نمو وانقسام الخلايا البكتيرية الفردية.
قم بتثبيت الجهاز المحمل بعناية على إدخال المسرح عن طريق لصق زجاج الغطاء على جانبي PDMS في أسفل إدخال المسرح. اقلب مجموعة جهاز إدخال المرحلة بحيث يكون جهاز PDMS مواجها للأعلى وضعه على سطح ناعم مثل مسح خال من الغبار.
اضبط معدل تدفق مضخة الحقنة الطور الأول إلى 35 ميكرولتر في الدقيقة. ثم العمل مع مسار واحد في كل مرة، أدخل إبرة الإدخال ثم إبرة المخرج التي تمتد إلى كأس النفايات. بعد فحص الجهاز بصريا بحثا عن تسريبات، افحص أنبوب المخرج بحثا عن ظهور خلايا زائدة تظهر كشريط عكر في الغضروف الهلالي المتوسط، والذي يتحرك ببطء نحو كأس النفايات.
بمجرد أن يعمل الجهاز حوالي 15 دقيقة، اضبط مضخة الحقنة في المرحلة الأولى على 1.5 ميكرولتر في الدقيقة وأوقف التدفق. أحضر المضخة والجهاز بالكامل إلى مجهر فلوري مقلوب وأعد تشغيل تدفق الوسط من المرحلة الأولى بسرعة 1.5 ميكرولتر في الدقيقة. قم بتثبيت إدخال المرحلة بعناية مع الجهاز على المجهر، باستخدام الشريط اللاصق حسب الحاجة لتوجيه أنابيب المدخل والمخرج.
حدد المواقع المناسبة على الجهاز للتصوير وابدأ التصوير حسب الرغبة. لاحظ أن الخلايا عادة ما تحتاج إلى بضع ساعات لقراءة نمو الطور المستقر والأسي، وقد يتأخر بدء التقاط الصورة كما هو مرغوب حتى يبدأ التصوير بعد فترة التوازن.