موسوعة JoVE للتجارب
Microbiology
0 مشاهدة • 2:23 دقيقة • November 28th, 2025
ابدأ بالمكورات العنقودية الذهبية المعلقة في محلول تبريد يحتوي على خرز سيليكا، مخزنة في درجة حرارة منخفضة للحفاظ على حالتها الأيضية.
تجانس البكتيريا في الظروف الباردة لإطلاق محتويات داخل الخلية مع تقليل التحلل الإنزيمي للمستقلبات.
يقوم بطرد المركزي بإزالة الليزات وجمع السوبرناتانت الغني بالمستقلبات.
أضف مذيبا عضويا إلى المستخلص والدوامة لترسيب الجزيئات الكبيرة من المستقلبات الذائبة.
الطرد المركزي لإزالة الترسيب ونقل المادة الفائقة إلى القوارير.
تحميل القوارير في نظام كروماتوغرافيا سائل ومطياف كتلة.
داخل عمود الكروماتوغرافيا، تتفاعل المستقلبات مع الطور الثابت الصلب بناء على خصائصها الكيميائية.
أضف حاجزا لاستخراج المستقلبات. ثم توجه المستقلبات إلى مصدر التأين الكهربائي في مطياف الكتلة لتأيينها.
ثم تفصل الأيونات بناء على نسب الكتلة إلى الشحنة.
تتم مقارنة البيانات الناتجة مع قاعدة بيانات مرجعية لتحديد المستقلبات.
لبدء استخراج المستقلب، قم أولا بإذابة العينات على الجليد الرطب. ثم تعطيل الخلايا في جهاز تجانس بأربع دفعات مدة كل منها 30 ثانية بسرعة 6000 دورة في الدقيقة، مع فترتي تبريد دقيقتين على الجليد الجاف بين الدورات.
قم بتنظيف الليزات لمدة 15 دقيقة في أنبوب طرد مركزي دقيق مبرد مسبقا وعند أقصى سرعة. بعد الطرد المركزي، انقل المادة الفائقة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق نظيف. باستخدام ميكروبيبت، نقل جزء صغير من العينة إلى أنبوب طرد مركزي دقيق لقياس محتوى الببتيدات المتبقي كما هو موضح في بروتوكول النص.
خزن ما تبقى من العينة عند ناقص 80 درجة مئوية. راجع بروتوكول النص لتحليل المستقلبات عبر الكروماتوغرافيا السائلة ومطياف الكتلة.