إجراء كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة لتقييم تحلل إكسوبوليسكاريدات البكتيرية

ابدأ بالمواد الفائقة المخمرة التي تحتوي على السكريات الخارجية المتحللة وغير المتحللة، أو EPS.

يتم الحصول على هذه البكتيريا البرازية أثناء التخمير، حيث تؤثر مجموعات بكتيريا البراز المميزة في كل مادة فائقة على EPS بشكل مختلف.

حدد الفائقات الفائقة بالقرب من قاعدة صفيحة كروماتوغرافية رقيقة مطلية مسبقا بطور قطبي ثابت.

تجفيف اللوح بالهواء، ثم وضعه في غرفة تحتوي على طور متحرك ذو قطبية أقل من الطور الثابت.

مع ارتفاع المرحلة المتنقلة، تهاجر EPS بناء على قطبيتها وحجمها.

تتفاعل الأنابيب الكبيرة غير المتحللة بقوة مع الطور الثابت وتبقى بالقرب من النقطة الأصلية.

ترتبط الشظايا الصغيرة المتحللة بشكل ضعيف وتهاجر للأعلى مع الطور المتحرك.

أزل الطبق وجففه بالهواء.

اغمر الطبق في مادة تلوين كربوهيدرات تتفاعل مع EPS.

جفف الطبق بالهواء، ثم سخنه لتجفيف EPS وتكوين شرائط ملونة.

شريط واحد بالقرب من المصدر يؤكد وجود EPS غير متحلل، بينما تؤكد عدة نطاقات تحلل EPS بواسطة البكتيريا.

قم بتحميل 0.2 ميكرولتر من المواد الفائقة المخمرة على كل لوح ألمنيوم من جل السيليكا المطلي مسبقا 60 TLC وادمر الدوارة للانتشار. ثم استخدم مجفف شعر مع هواء ساخن ليجف.

اغمر أحد طرفي الألواح المأخوذة عينات في محلول 20 ملليتر من حمض الفورميك:n-بوتانول:محلول الماء لعدة دقائق، حتى يمتد الرحلان الكهربائي تقريبا إلى الطرف الآخر. ثم أخرج الصحون بالملاقط، وجففها بمجفف الشعر. ثم انقع الصحون في مادة الأورسينول لمدة دقيقتين لتصبغ وتجف مرة أخرى.

انقل الصحون إلى فرن الخبز على حرارة 120 درجة مئوية لتسخن لمدة ثلاث دقائق. ثم التقط صورا لللوحة لتقييم تدهور EPS عن طريق قياس نطاقات TLC.