موسوعة JoVE للتجارب
Microbiology
0 مشاهدة • 2:06 دقيقة • February 26th, 2026
ابدأ بمزرعة أكتينوميسس المصابة بالساكاريبكتيريا.
البكتيريا السكرية، وهي بكتيريا طفيلية صغيرة جدا، ومضيفها يشكلان مزرعة ثنائية.
أضف كمية من الثقافة المصابة إلى أنبوب PCR يحتوي على كواشف تضخيم مع صبغة تتبع الرحلان الكهربائي وبادئات خاصة بالسكريات.
ضع الأنبوب في جهاز تدوير حراري مع شروط PCR محددة.
خلال عملية إزالة الطبيعة الأولية، تقوم الحرارة بتحلل الساكاريبكتيريا، مما يطلق الحمض النووي الجيني. تظل الأكتينوميسس سليمة بسبب جدران الخلايا الصلبة، مما يحد من إطلاق الحمض النووي للمضيف.
ثم تقوم الحرارة بتفكيك خيوط حمض نووي ساكاريبكتيريا وتنشط بوليميراز تاك.
أثناء التلدين، ترتبط البادئات بتسلاسل مكملة في جينوم السكاريبكتيريا.
وبالتمديد عليه، يضيف بوليميراز Taq dNTPs إلى البرايمرات، مما يصنع خيوط DNA جديدة.
قم بتحميل منتج PCR المضخم على جل أغاروز ملون مسبقا بصبغة ترتبط بشظايا الحمض النووي.
قم بإجراء الرحلان الكهربائي وتصور الجل تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية.
يؤكد شريط الأمبليكون الخاص بالساكاريبكتيريا تفاعل المضيف مع الطفيلي في الزراعة الثنائية.
خلط Aliquot 24 ميكرولتر من PCR الرئيسي في أنبوب PCR بسعة 0.2 ملليتر. عند ميكرولتر واحد من الساكاريبكتيريا المصابة بمزرعة، وضع الأنبوب في جهاز دورة حرارية.
قم بضبط برنامج PCR كما هو موضح في المخطوطة النصية. حمل وتشغيل منتجات PCR على جل Agros بنسبة 1٪. شريط من حوالي 600 قاعدة سيؤكد وجود البكتيريا السكرية.