الفحص اللوني للقياس الكمي للكربوهيدرات غير الهيكلية في الأنسجة النباتية

الكربوهيدرات القابلة للهضم هي المكونات غير الهيكلية للأنسجة النباتية ، وتعمل كمصدر طاقة احتياطي لنمو النبات والتمثيل الغذائي.

لتحديد كمية الكربوهيدرات غير الهيكلية ، خذ كمية مقاسة من الأنسجة النباتية في أنبوب. أضف حامض الكبريتيك المخفف إلى الأنبوب ، وقم بتسخين العينة. عند التسخين ، يقوم حمض الكبريتيك بتحلل السكريات المائية للكربوهيدرات القابلة للهضم إلى وحداتها الفرعية أحادية السكاريد.

تبريد العينة. قم بالطرد المركزي للأنبوب لحبيبات المواد النباتية غير المهضومة والحصول على مادة طافية تحتوي على السكريات الأحادية.

استنشق المادة الطافية في أنبوب جديد ، وعالج السكريات الأحادية بمحلول الفينول ، متبوعا بإضافة حمض الكبريتيك. دوامة الأنبوب لخلط المحتوى واحتضانه.

أثناء الحضانة ، يقوم حمض الكبريتيك بتجفيف السكريات الأحادية لإنتاج مشتقات الفورفورال. تتفاعل مشتقات الفورفورال هذه مع الفينول لإنتاج محلول من الذهب الأصفر.

تحديد امتصاص محلول الذهب الأصفر بالمنظار عند 490 نانومتر ، وهو ما يتوافق مع محتوى الكربوهيدرات في عينة النبات.

بعد ذلك ، خذ تركيزات مختلفة من محاليل الجلوكوز وكرر معالجة حمض الفينول والكبريتيك للحصول على شدة ألوان مختلفة ، ورسم منحنى قياسي. قارن قيمة امتصاص عينة الكربوهيدرات غير المعروفة بمعيار الجلوكوز للحصول على محتوى الكربوهيدرات القابلة للهضم في الأنسجة النباتية.

أولا ، قم بوزن التكرارات من كل عينة من الأنسجة في أنابيب زجاجية سعة 15 ملليلترا. قم بتسمية الأنابيب وتسجيل الكتلة الدقيقة لكل عينة.

بعد ذلك ، أضف 1 مليلتر من 0.1 مولار من حمض الكبريتيك إلى كل أنبوب ، وأغلق الأغطية بإحكام. ثم ضع الأنابيب في حمام مائي مغلي لمدة 1 ساعة.

انقل الأنابيب إلى حمام مائي فاتر لتبرد. ثم صب محتويات الأنابيب في أنابيب الطرد المركزي الدقيقة سعة 1.5 ملليلتر. بعد ذلك ، قم بالطرد المركزي للأنابيب عند 15,000 جم لمدة 10 دقائق. استخدم ماصة دقيقة لنقل المادة الطافية إلى أنابيب جديدة سعة 1.5 ملليلتر.

باستخدام ماصة، انقل 15 ميكرولترا من كل عينة غير معروفة إلى أنبوب الاختبار الخاص بها. ثم أضف 385 ميكرولتر من الماء المقطر إلى كل أنبوب.

في غطاء الدخان ، أضف 400 ميكرولتر من 5٪ فينول إلى كل أنبوب اختبار عينة قياسي وغير معروف. بعد ذلك مباشرة ، أضف 2 مل من حمض الكبريتيك إلى كل أنبوب.

تأكد من إضافة حمض الكبريتيك إلى سطح المحلول.

بعد احتضان الأنابيب لمدة 10 دقائق ، قم بدوامة الأنابيب. ثم احتضان الأنبوب لمدة 30 دقيقة إضافية.

انقل 800 ميكرولتر من كل أنبوب عينة إلى ثلاثة كوفيت شبه دقيقة من البوليسترين سعة 1.5 مل. بعد ذلك ، اضبط مقياس الطيف الضوئي على القراءة عند 490 نانومتر ، وقم بمعايرته باستخدام كوفيت فارغ.

أخيرا ، قم بتشغيل كل كوفيت من خلال مقياس الطيف الضوئي ، وسجل الامتصاص.