استزراع الخلايا التائية المنشطة من خلايا الدم المحيطية البشرية أحادية النواة

التفاعلات المتعددة بين الخلايا التائية الساذجة والخلايا العارضة للمستضد ، APCs ، تثير تنشيط الخلايا التائية وتكاثرها.

يتضمن

الحدثان الأساسيان في هذه العملية التعرف على المستضد المعبر عنه بواسطة APC بواسطة مركب مستقبلات الخلايا CD3-T ، متبوعا بالتفاعل بين ترابط B7 المعبر عنه بواسطة APC ومستقبل الخلايا التائية CD28.

لدراسة تنشيط الخلايا التائية وتكاثرها في المختبر ، خذ الخلايا أحادية النواة أحادية الدم المحيطية البشرية ، PBMCs ، معلقة في وسط ثقافة مناسب. أضف حبات مغناطيسية مطلية بأجسام مضادة مضادة ل CD3 و CD28 ، وقسم الخلايا إلى أنبوبين مخروطيين.

أضف السيتوكين إنترلوكين -2 ، IL-2 ، إلى الأنبوب الأول والإنترلوكين -15 ، IL-15 ، إلى الأنبوب الآخر. انقل الخلايا إلى صفيحة متعددة الآبار. حضن.

ترتبط الأجسام المضادة للخرز المضادة ل CD3 و CD28 بمركب مستقبلات الخلايا التائية CD3-T ومستقبل CD28 المعبر عنه على الخلايا التائية ، على التوالي ، مما يتسبب في تنشيط الخلايا التائية وتكاثرها.

مع IL-2 ، يرتبط السيتوكين بمستقبله على سطح الخلية التائية المنشطة ، مما يؤدي إلى تمايزه وتكاثره في الخلايا التائية المستجيبة. على العكس من ذلك ، فإن IL-15 يقود بشكل أساسي تمايز الخلايا التائية وتكاثرها في خلايا الذاكرة التائية.

قم بتعليق ونقل نصف الخلايا إلى آبار جديدة للسماح بالنمو الخلوي. أضف وسيطا جديدا يحتوي على IL-2 أو IL-15 للحفاظ على مجموعات الخلايا التائية المتمايزة بالسيتوكين للتحليل اللاحق.

للبدء ، اغسل حبات CD3 / CD28 عن طريق نقل 12.5 ميكرولتر من الخرز لكل مليون خلية إلى أنبوب طرد مركزي دقيق ، وإضافة 12.5 ميكرولتر من PBS لكل 12.5 ميكرولتر من الخرز في الأنبوب. بعد ذلك ، ضع أنبوب الطرد المركزي الدقيق على مغناطيس مناسب لمدة 1 دقيقة ، وتخلص من المخزن المؤقت ، وأعد تعليق الخرزات في الحجم الأصلي لوسط الخلية التائية.

بعد ذلك ، أضف 12.5 ميكرولتر من الخرزات لكل مليون خلية بنسبة 1 إلى 2 حبة إلى خلايا ، وقسم الخلايا إلى حالتين مع حوالي 5 ملايين خلية في كل منهما. بعد ذلك ، أضف الحجم الصحيح للسيتوكينات إلى كل حالة ، وانقل الخلايا إلى ألواح متعددة الآبار. احتضان الخلايا لمدة ثلاثة أيام عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

بعد ثلاثة أيام من الحضانة ، قم بإعداد وسط خلية تائية طازجة بضعف تركيز السيتوكينات. قم بتعليق الخلايا وتقسيمها عن طريق نقل نصف الحجم من كل بئر إلى بئر جديد. ثم أضف نفس الحجم من وسط الخلية التائية المحضرة حديثا إلى كل بئر.