تقنية في المختبر لدراسة تكوين المركب الالتهابي في البلاعم

ابدأ بلوحة تحتوي على ثقافة البلاعم الأولية.

أدخل عديدات السكاريد الدهنية البكتيرية ، LPS ، التي ترتبط بمستقبلات شبيهة بالحصيلة على الضامة ، مما يؤدي إلى تنظيم نطاق البيرين المكون من عائلة البروتين NLR الذي يحتوي على 3 أو NLRP3.

أضف الأيونوفور الذي يتوسط تدفق أيونات البوتاسيوم. يؤدي انخفاض البوتاسيوم العصاري الخلوي إلى تنشيط NLRP3. يعمل NLRP3 المنشط على قلة القلة وتحفز على تجنيد بروتين محول ، والذي بدوره يجند برو-كاسباز -1 ، مكونا التهابا.

يحول التحلل الذاتي البروتين

برو-كاسباز -1 إلى كاسباز 1 النشط ، والذي يتوسط موت الخلايا الالتهابية أو داء الحمى الحراري. يؤدي تلف الحمض النووي أثناء داء الحمى إلى التكثيف النووي.

إصلاح الخلايا ومعالجتها بمنظف لنفاذها.

أضف جسما مضادا أساسيا مرتبطا ببروتين المحول المرتبط بالالتهابات ، وجسما مضادا ثانويا يحمل علامة فلورية يرتبط بالجسم المضاد الأساسي ، مع تسمية الالتهاب

.

أدخل صبغة الحمض النووي الفلوري لتسمية النواة. تحت المجهر الفلوري ، تعرض الخلايا نوى مكثفة - تشير إلى داء الحمى - وبؤر بروتينات المحول - مما يشير إلى تكوين الالتهابات.

للتحليل الكيميائي المناعي للخلايا المعالجة بالنيجيريسين ، اغسل الخلايا المسمى المسبار ، واحتضان الخلايا في 250 ميكرولتر من محلول التثبيت والنفاذية لكل بئر لمدة 30 دقيقة على الجليد ، محمية من الضوء.

اغسل البلاعم ثلاث مرات أخرى باستخدام محلول غسيل طازج ، وقم بتسمية الخلايا ب 250 ميكرولترا من الجسم المضاد الأولي ضد البروتين الشبيه بالبقع المرتبط بموت الخلايا المبرمج الذي يحتوي على مجال تجنيد الكاسباز الطرفي C ، أو ASC ، لكل بئر لمدة ساعة واحدة على الجليد.

اغسل الخلايا في نهاية الحضانة ، وقم بتسمية العينات ب 250 ميكرولتر من الجسم المضاد الثانوي المناسب المترافق بالصبغة الفلورية لمدة ساعة أخرى على الجليد ، مع إضافة 4 ميكرولترات من صبغة تلطيخ نووية فلورية مناسبة خلال آخر 5 دقائق.

بعد غسل الخلايا 3 مرات في المخزن المؤقت للغسيل البارد ، قم بتركيب أغطية على الشرائح بسعة 7 ميكرولتر من وسط التثبيت المضاد للبهتان كما هو موضح ، وقم بتصوير البلاعم عن طريق الفحص المجهري متحد البؤر الفلوري.