موسوعة JoVE للتجارب
Immunology
0 مشاهدة • 4:06 دقيقة • July 8th, 2025
اسمح للفأر المحبوس باستهلاك مياه الشرب الممزوجة بعديد السكاريد الاصطناعي المكبريت المعروف بأنه يسبب التهاب القولون ، وهو مرض التهاب في الأمعاء.
يخترق عديد السكاريد هذا تجويف الأمعاء ويعطل الحاجز الظهاري ، مما يسمح للميكروبات المتعايشة باختراق الأنسجة ، مما يؤدي إلى الالتهاب.
تتسلل الخلايا الوحيدة إلى الأنسجة وتتمايز إلى ضامة.
حقن الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروفور عن طريق الوريد في ذيل الفأر.
تصل الأجسام المضادة إلى القولون وترتبط بالبروتين السكري المستهدف على البلاعم ، مع تسمية الخلايا.
تخدير الماوس. احلق فرو البطن لتقليل انعكاس الضوء وامتصاصه أثناء التصوير.
ضع الماوس في شريط فحص وأدخله في التصوير المقطعي بوساطة التألق أو ماسح ضوئي FMT.
عند الإثارة ، ينبعث الفلوروفور من تألق. التقط صور انعكاس التألق لإعادة بناء خريطة ثلاثية الأبعاد توضح التوزيع المكاني للفلوروفورات.
تشير شدة التألق المرتفعة إلى زيادة تسلل البلاعم.
للحث على التهاب القولون ، املأ إمدادات الشرب من الفئران التجريبية ب 2 جرام من كبريتات الصوديوم ديكستران ، أو DSS ، المذابة في 100 مل من مياه الشرب المعقمة ، مع تقدير 5 مل من الماء لكل فأر يوميا. قبل 24 ساعة من المسح ، قم بتحميل كوكتيل الأجسام المضادة ذات الأهمية في حقنة معقمة محمية من الضوء ، وحقن الأجسام المضادة عن طريق الوريد في أوردة الذيل لحيوانات التجارب.
في يوم التجربة ، استخدم ماكينة حلاقة كهربائية لحلاقة الفراء في منطقة البطن لحيوانات التجربة لتقليل انعكاس الضوء وامتصاصه. باستخدام شبح يحاكي الأنسجة بخصائص سمك وامتصاص محددة ، املأ الشبح بحجم معين من محلول الجسم المضاد المعني ، وقم بقياس التألق على جهاز FMT.
بعد ذلك ، على التصوير المقطعي البيطري بوساطة التألق ، أو جهاز FMT للحيوانات الصغيرة ، انقر فوق دراسة جديدة وقم بتضمين أدوات التتبع ذات الصلة في وصف الدراسة ، بما في ذلك معلمات التصوير وجرعاته. إنشاء مجموعات دراسة وفقا لتصميم الدراسة التجريبية ، وتزويد كل مجموعة بالعدد المناسب من.
عندما تتم معايرة النظام لتركيبات التتبع ، ضع أول فأر مخدر في وضع ضعيف في كاسيت فحص قابل للتسخين بدرجة حرارة 42 درجة مئوية. أدخل الدرج في نظام التصوير، وحدد العينة المناسبة من لجنة الدراسة المقابلة. حدد المتتبع الذي تم إعطاؤه للتأكد من أن قيم تركيز التتبع محسوبة بشكل صحيح والحصول على صورة انعكاس التألق بالطول الموجي المناسب للفحص.
انقر فوق Acquire Image لتحديد حقل المسح الضوئي والتأكد من ظهور حقل المسح الضوئي كتراكب على صورة انعكاس التألق. اضبط مجال المسح الضوئي حتى يحيط بالمنطقة التي تهمك ، مع الحرص على تجنب الهواء أو مناطق الفراء المتبقية.
بناء على هدف الصورة، حدد دقة حقل مسح ضوئي لتعيين عدد نقاط بيانات الصورة داخل حقل المسح. ثم انقر فوق مسح ضوئي لبدء الحصول على الصورة بالطول الموجي المحدد. في نهاية الفحص ، قم بإزالة من الكاسيت للسماح للحيوان بالتعافي تماما مع المراقبة قبل العودة إلى قفصه. يمكن بعد ذلك تكرار FMT في نقاط زمنية مختلفة حسب الاقتضاء تجريبيا.