بناء شبكات عصبية ثلاثية الأبعاد مقترنة بمصفوفات الأقطاب الكهربائية الدقيقة

خذ تعليقا من الخلايا العصبية في الحصين لجنين الفئران.

انقل الخلايا العصبية إلى المنطقة النشطة المطلية بعامل الالتصاق لمجموعة الأقطاب الكهربائية الدقيقة ، أو MEA. هذه المنطقة النشطة محصورة بهيكل بوليمر.

احتضان منطقة الشرق الأوسط وأفريقيا. تلتصق الخلايا العصبية بالمنطقة النشطة المطلية في منطقة الشرق الأوسط وإفريقيا ، وتشكل شبكة عصبية ثنائية الأبعاد.

بالإضافة إلى ذلك ، انقل الخلايا العصبية إلى طبقة أحادية من الخيزة الزجاجية المطلية بعامل الالتصاق في إدخالات غشائية داخل صفيحة متعددة الآبار.

احتضان الخلايا العصبية لتلتصق بالخرز المطلي بعامل الالتصاق.

نقل الميكروبيدات مع الخلايا العصبية الملتصقة إلى منطقة MEA المحصورة التي تحتوي على الشبكة العصبية.

تتجمع الميكروبيدات ذاتيا لتشكيل هيكل سداسي.

كرر نقل الميكروبيدات في منطقة الشرق الأوسط وأفريقيا عدة مرات ، وقم ببناء طبقات تتجمع ذاتيا ، وتشكل هيكلا ثلاثي الأبعاد معبأ.

إضافة وسائط إلى المنطقة النشطة المحصورة في منطقة الشرق الأوسط وأفريقيا واحتضانها.

تنمو الخلايا العصبية ، وتشكل شبكة عصبية ثلاثية الأبعاد مترابطة.

ضع الخلايا بكثافة 2,000 خلية لكل ملليمتر مربع على المنطقة النشطة من منطقة الشرق الأوسط وإفريقيا ، والتي يحددها قيد PDMS لإنشاء شبكة عصبية ثنائية الأبعاد. بعد ذلك ، ضع جهاز MEA في الحاضنة مع جو ثاني أكسيد الكربون المرطب بنسبة 5٪ عند 37 درجة مئوية.

لإكمال الخطوة الأولية لبناء ثقافة ثلاثية الأبعاد ، قم بتوزيع 160 ميكرولترا من التعليق بتركيز خلية من 600 إلى 700 خلية لكل ميكرولتر على سطح الطبقة الأحادية للميكروبيدات الموضوعة داخل الألواح متعددة الآبار. بعد ذلك ، ضع الألواح متعددة الآبار في الحاضنة مع جو ثاني أكسيد الكربون المرطب بنسبة 5٪ عند 37 درجة مئوية.

بعد ست إلى ثماني ساعات من الطلاء ، انقل 30 إلى 40 ميكرولترا من التعليق باستخدام الميكروبيدات والخلايا العصبية إلى منطقة الشرق الأوسط وأفريقيا المحددة بقيود PDMS. بعد كل عملية نقل ، انتظر حوالي نصف دقيقة للسماح للميكروبيدات بالتجميع الذاتي في هيكل مضغوط سداسي. بمجرد ترسيب جميع الطبقات وتجميعها تلقائيا ، أضف 300 ميكرولتر من الوسط في الجزء العلوي من المنطقة المحددة بقيود PDMS.

ضع الهيكل ثلاثي الأبعاد مقترنا بمنطقة الشرق الأوسط وأفريقيا في الحاضنة عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 48 ساعة.