موسوعة JoVE للتجارب
Neuroscience
0 مشاهدة • 1:46 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بتعليق خلية واحدة من الخلايا السلفية العصبية الجنينية للفأر في وسط عصبي قاعدي.
يحتويالوسط على العناصر الغذائية الأساسية للحفاظ على بقاء الخلية.
قم بتوزيع قطرات صغيرة من معلق الخلية هذا على غطاء طبق ثقافة غير لاصق ، مع التأكد من تباعدها.
اقلب الغطاء ، مما يؤدي إلى تكوين قطرات معلقة.
ضع الغطاء فوق الطبق الذي يحتوي على مخزن مؤقت لإنشاء بيئة رطبة تمنع تبخر الوسائط واحتضانها.
داخل القطرات المعلقة ، يحافظ التوتر السطحي للسائل على شكل القطرة.
هذا الشكل الحبس يقيد الخلايا إلى مساحة محدودة دون أن ينتشر.
بالإضافة إلى ذلك ، توجه قوى الجاذبية داخل القطرات الخلايا نحو المنطقة السفلية.
عندما تتلامس الخلايا السلفية العصبية بشكل أوثق ، فإنها تتجمع تلقائيا لتشكيل بنية ثلاثية الأبعاد تعرف باسم كرة الخلايا العصبية.
لتحضير كرات الخلايا العصبية ، اضبط كثافة الخلية في معلق الخلية هذا إلى 1 مليون خلية لكل مليلتر باستخدام وسط NGB. أضف 7 مل من PBS إلى الجزء السفلي من أطباق الثقافة. استزراع الخلايا العصبية القشرية على شكل قطرات معلقة سعة 10 ميكرولتر تحتوي على 10,000 خلية لكل قطرة داخل الجفون العلوية لأطباق الاستزراع التي يبلغ طولها 10 سم. احتفظ بالأطباق في حاضنة لمدة ثلاثة أيام عند 37 درجة مئوية مع 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 في ظروف رطبة للسماح بتكوين كرة الخلايا العصبية.