تفريق الخلايا السلفية العصبية المستحثة إلى خلايا نجمية

خذ مزرعة الخلايا السلفية العصبية المستحثة ، أو iNPCs ، على صفيحة متعددة الآبار المغلفة بالبروتين خارج الخلية.

استبدل الوسائط بوسائط الحث الدبقي واحتضنها. عوامل النمو والهرمونات في وسائل الإعلام تسهيل التمايز iNPC إلى خلايا السلائف الدبقية.

قم بتغيير الوسائط كل يومين لتكاثر الخلايا. ثم استبدل الوسائط بوسائط الخلايا النجمية واحتضنها.

تؤدي

العناصر الغذائية المحددة وعوامل النمو في الوسائط إلى تمايز الخلايا السليفة الدبقية إلى خلايا نجمية.

تعمل التغييرات الإعلامية كل يومين على تعزيز نضوج الخلايا النجمية.

قم بتغيير الوسط إلى وسيط الفرق العصبي عندما تكون الخلايا ملتصقة بنسبة 70٪ تقريبا واستمر في تغيير الوسط كل يومين لمدة ثلاثة أسابيع. لا تقسم الخلايا أثناء التمايز. بعد ثلاثة أسابيع ، يجب أن تعبر الخلايا عن العلامة العصبية TuJ1.

لاكتساب الخلايا العصبية والأنواع الفرعية العصبية الأكثر نضجا ، استمر في التمايز لمدة تصل إلى ثلاثة أشهر. لتمايز iNPCs على وجه التحديد نحو سلالة الدبقية, تغيير وسط الحث المتوسط إلى الدبق, بما في ذلك 20 نانوغرام لكل مليلتر من عامل نمو البشرة للحث على التمايز إلى خلايا السلائف الدبقية. قم بإزالة نصف الوسط واستبدله بوسط طازج كل يومين لمدة أسبوعين تقريبا.

خلال هذه الفترة ، يجب تقسيم الخلايا من 1 إلى 3 في وجود 10 مثبطات ميكرومولار Rho-kinase عند الوصول إلى التقاء 100٪. بعد أسبوعين ، قم بتمييز الخلايا إلى خلايا نجمية عن طريق تغيير وسط الخلايا النجمية المتاح تجاريا عندما تكون الخلايا ملتقية تقريبا والاستمرار في تغيير الوسط كل يومين. بعد سبعة أيام تقريبا ، تبدأ الخلايا في التعبير عن علامات الخلايا النجمية.