موسوعة JoVE للتجارب
Neuroscience
0 مشاهدة • 3:13 دقيقة • July 8th, 2025
خذ تعليق الخلايا النجمية.
أضف محلول الحبر الحيوي الذي يحتوي على الجيلاتين ومشتقات الجيلاتين القابلة للربط الضوئي والبادئات الضوئية والفيبرينوجين واللامينين.
انقل التعليق إلى حقنة بإبرة حادة.
قم بتبريد المحقنة للتبلور بالحبر الحيوي. قم بتوصيل المحقنة برأس طباعة الطابعة الحيوية.
ضع الإبرة بشكل مناسب على لوحة الثقافة. بدء الطباعة الحيوية مع تعيين المعلمات والتصميم.
يتم دفع الحبر الحيوي المحتوي على الخلايا النجمية خارج الإبرة ، ويتم ترسيبه في طبقات على اللوحة ، ويشكل هيكلا ثلاثي الأبعاد مع الخلايا النجمية المحاصرة.
قم بتعريض البنية المطبوعة بيولوجيا للأشعة فوق البنفسجية. يساعد البادئ الضوئي في التشابك المشتق من الجيلاتين ، مما يعزز استقرار البناء الحيوي.
عالج بأيونات الثرومبين والكالسيوم.
يقوم الثرومبين ، مع أيونات الكالسيوم ، بتحويل الفيبرينوجين إلى الفيبرين ، ويتجمع في شبكة بوليمر حيوي ثلاثية الأبعاد مستقرة.
تخلص من المحلول واغسله بمخزن مؤقت لإزالة عوامل التشابك.
أضف وسائط الخلايا النجمية واحتضنها. يساعد Laminin على التصاق الخلايا النجمية وانتشارها ، وتشكيل نسيج شبيه بالأعصاب ثلاثي الأبعاد غني بالخلايا النجمية.
للحصول على تركيز نهائي يبلغ 1 × 106 خلايا لكل مليلتر ، انقل 1 ملليلتر من محلول الجيلاتين والجيلاتين والميثاكريلويل والفيبرينوجين إلى الأنبوب الذي يحتوي على الخلايا ، وقم بالتجانس عن طريق سحب العينات برفق لأعلى ولأسفل. استخدم ماصة سعة 1000 ميكرولتر لنقل الخلايا النجمية الموضوعة ببطء في محلول الحبر الحيوي الجيلاتين-الجيلاتين-ميثاكريلويل-الفيبرينوجين إلى حقنة بلاستيكية سعة 5 ملليلتر، وتجنب تكوين الفقاعات. قم بتوصيل إبرة حادة معقمة قياس 22 بالمحقنة.
قم بتعريض الطابعة الحيوية لضوء الأشعة فوق البنفسجية لمدة 15 دقيقة ، ثم امسح الطابعة الحيوية بنسبة 70٪ من الإيثانول. ثم قم بتوصيل المحقنة برأس طباعة الطابعة الحيوية، وقم بمسح الحبر الحيوي يدويا لإزالة الفقاعات المتبقية.
لإجراء الطباعة الحيوية ، ضع طبق استزراع 35 ملم على طاولة الطابعة الحيوية. ضع الإبرة على بعد 0.1 ملم من سطح طبق الاستزراع للسماح بحركة الإبرة ، واضغط على زر الطباعة. بمجرد انتهاء الطباعة الحيوية ، تأكد من أن المحقنة تتحرك بعيدا عن الطبق ، وأغلق طبق الثقافة. ضع طبق الثقافة تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية للربط المتقاطع بين الجيلاتين والميثاكريلويل.
استخدم ملعقة معقمة لنقل الهيكل المطبوع بيولوجيا إلى صفيحة مكونة من 24 بئرا ، وأضف 500 ميكرولتر من محلول كلوريد الكالسيوم الثرومبين ، واتركه لمدة 30 دقيقة للسماح بالربط المتقاطع للفيبرين. بعد إزالة محلول الربط المتقاطع ، اغسل الهيكل ب 2 مل من PBS. ثم استبدل PBS ب 1 مليلتر من وسط زراعة الخلايا النجمية. احتضان عند 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون ، وقم بتغيير الوسط كل ثلاثة أيام.