موسوعة JoVE للتجارب
Neuroscience
0 مشاهدة • 2:18 دقيقة • July 8th, 2025
ابدأ بلوحة متعددة الآبار تحتوي على خلايا جذعية بشرية متعددة القدرات ملتصقة مع قدرة تمايز متعددة السلالات.
أدخل وسط الخلايا الجذعية الذي يحتوي على ثنائي ميثيل سلفوكسيد أو DMSO.
يدخل DMSO إلى الخلايا ويمنع تطور دورة الخلية من مرحلة الفجوة 1 ، أو مرحلة G1 ، وهي مرحلة أولية من دورة الخلية ، إلى مرحلة التوليف أو المرحلة S.
هذا يخلق مجموعة موحدة من الخلايا في مرحلة G1 ، مما يعزز قدرتها على التمايز.
استبدل الوسط بوسط تمايز الأديم الظاهر الغني بالمغذيات يحتوي على مثبطات لمسارات إشارات BMP و TGF-β.
ترتبط هذه المثبطات بمستقبلات ALK محددة على الخلايا الجذعية ، مما يمنع مسارات إشارات BMP و TGF-β ويمنع تمايزها إلى سلائف الأديم الباطن والأديم المتوسط.
هذا يسمح بالتمايز الانتقائي للخلايا الجذعية التي تم اعتقافها بواسطة G1 إلى سلائف الأديم الظاهر التي تمتلك قدرة التمايز العصبي.
استبدل الوسط بانتظام بوسط جديد للحفاظ على مستويات المغذيات وعامل التمايز ، مما يضمن بقاء الخلية.
معالجة الخلايا باستخدام DMSO كما هو موضح للثقافات ثنائية الأبعاد وإعداد حلول مخزون Noggin و SP431542. قم بإعداد ما يكفي من استبدال مصل الضربة القاضية بنسبة 10٪ أو KOSR في خروج المغلوب DMEM لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام من تغيير الوسائط. قم بإعداد وسائط تمايز الأديم الظاهر عن طريق إضافة Noggin و SP431542 إلى KOSR بالضربة القاضية DEM كما هو موضح في المخطوطة.
بعد المعالجة المسبقة ل DMSO ، استنشق الوسائط من الخلايا ، وأضف 2 ملليلتر من وسائط التمايز إلى كل بئر. اسمح للخلايا بالحضانة لمدة ثلاثة إلى أربعة أيام عند 37 درجة مئوية في حاضنة ثاني أكسيد الكربون ، واستبدال الوسائط يوميا بعوامل تمايز جديدة.