توليد شرائح قشرة الحمالة الأنسية الأنسية الأمامية من أدمغة الفئران

ابدأ برأس فأر مقطوع. قم بإزالة الجلد لكشف الجمجمة ، وافتح الجمجمة للوصول إلى الدماغ.

قم بإزالة البصيلات الشمية وقطع أي وصلات عصبية لاستخراج الدماغ إلى سائل دماغي نخاعي اصطناعي مؤكسج مثلج ، أو aCSF.

خذ الدماغ ، وقم بعمل قطعتين رأسيتين على كل نصف لفضح التشريح الداخلي.

قم بعمل قطعتين بزاوية لعزل المنطقة التي تحتوي على القشرة الحزامية الأمامية المهاد الإنسي أو مسار MT-ACC. يعمل MT ، وهو جزء من المهاد ، كمحطة ترحيل عبر الإسقاطات العصبية الممتدة إلى ACC في القشرة الأمامية.

قم بتثبيت الدماغ على صفيحة بزاوية باستخدام مادة لاصقة ، وقم بعمل قطع لفتح الدماغ وفضح المسار ، ثم قم بتثبيته بمرحلة عينة الاهتزاز.

ضع المرحلة في الاهتزاز ، وأضف المخزن المؤقت ، وقم بإنشاء شرائح تحتوي على مسار MT-ACC.

حافظ على شرائح الدماغ في تدفق مستمر من aCSF المؤكسج للحفاظ على صلاحيتها.

كشف جمجمة ، وتقليم العضلات المتبقية. بعد ذلك ، انزع السطح الظهري للجمجمة باستخدام rongeurs وقم بقص الجوانب. بعد ذلك ، باستخدام ملعقة ، قم بقطع البصيلات الشمية والوصلات العصبية على طول السطح البطني للدماغ قبل إزالتها.

انقل الدماغ بسرعة إلى دورق مليء ب ACSF المؤكسج المثلج. لتحضير شرائح تحتوي على مسار MT-ACC ، قم بعمل قطع سهمي 2 ملم جانبيا إلى خط الوسط في كل نصف كرة لعرض التشريح تحت القشري.

بعد ذلك ، قم بعمل قطع عرضي بزاوية موازية لمسار الألياف المرئي في المخطط. قم بعمل القطع المتقاطع الثاني بزاوية من الاتصال بين المخيخ والقشرة البصرية ، إلى نقطة المنتصف بين المسار الأمامي والقناة البصرية البطنية والموازية للمسار الحزامي للمهاد. بعد ذلك ، قم بتوصيل كتلة الدماغ بلوحة زاوية باستخدام مادة لاصقة cyanoacrylate.

قم بعمل قطع فوق نقطة التحول في المسار. بعد ذلك ، افتح اللوحة ، وقم بتسطيحها ، وألصقها على مرحلة الغرفة من الاهتزاز. بعد ذلك ، قم بتقسيم شرائح الدماغ بسمك 500 ميكرومتر واحتفظ بها في ACSF المؤكسج المثلج. انقل شريحة إلى غرفة التسجيل عند 32 درجة مئوية مع نضح مستمر من ACSF المؤكسج لمدة ساعة واحدة.