تسجيل خارج الخلية للنشاط الكهربائي في ذبابة الفاكهة الجهاز العصبي المركزي

ضع الجهاز العصبي المركزي المنقول ، أو الجهاز العصبي المركزي ، ليرقة ذبابة الفاكهة داخل غرفة تسجيل مملوءة بمحلول ملحي.

يشمل الجهاز العصبي المركزي المنقول العقد البطنية والأعصاب الطرفية الهابطة.

ضع قطب شفط في الطرف الخلفي من الجهاز العصبي المركزي المنقطع. قم بتوصيل الغرفة بسلك تأريض لتقليل ضوضاء الخلفية.

استخدم ضغطا سلبيا لسحب العصب المحيطي إلى القطب الكهربائي وبدء التسجيل خارج الخلية لنشاط الأعصاب.

مراقبة التوليد التلقائي لإمكانات العمل بواسطة الخلايا العصبية بمرور الوقت ، والتي تسمى تردد إطلاق النار الأساسي ، والسماح لها بالاستقرار.

أضف مذيبا كعنصر تحكم. سجل النشاط للتأكد من أن تردد إطلاق النار يظل متسقا مع خط الأساس.

أدخل عامل الاختبار المستهدف المذاب في المذيب وسجل تردد إطلاق النار.

تظهر الزيادة في التردد التأثير المثير للعامل ، بينما يشير انخفاض التردد إلى تأثير مثبط.

للبدء ، أولا ، اسحب قطب الماصة الزجاجية من الشعيرات الدموية الزجاجية البورسليكات إلى مقاومة تتراوح من 5 إلى 15 ميغا أوم. أدخل الجهاز العصبي المركزي المتقاطع في غرفة الشمع التي تحتوي على 200 ميكرولتر من المحلول الملحي. قم بتثبيت دبوس حشرة غير مطلي بمشبك تمساح ملحوم بسلك أرضي ، وأدخل الدبوس في المحلول الملحي لإكمال الدائرة. باستخدام المتلاعبات الدقيقة ، قم بتوجيه القطب الكهربائي إلى الطرف الذيلي للجهاز العصبي المركزي المنقول.

تخلص من ضوضاء الخلفية عن طريق ضبط مستوى العتبة في برنامج تحليل الاكتساب قبل توصيل جذوع الأعصاب الطرفية. ضع ضغطا سلبيا طفيفا على المحقنة لسحب الأعصاب الطرفية إلى قطب الشفط. ابدأ التسجيل على برنامج الحصول على البيانات ، واسمح لمعدل إطلاق الأساس بالتوازن لمدة خمس دقائق قبل جمع بيانات معدل إطلاق النار الأساسي.

بعد خمس دقائق ، أضف 200 ميكرولتر من المحلول الملحي والمركبة ليصل الحجم الإجمالي للغرفة إلى 400 ميكرولتر لبدء تسجيل معدلات إطلاق التحكم. تجاهل التحضير والتسجيل إذا كان نمط إطلاق معالجة التحكم لا يشبه المثال الموضح هنا.

عندما يتم إنشاء خط الأساس بعد 3 إلى 5 دقائق من التسجيل ، اسحب 200 ميكرولتر من المحلول الملحي وأضف 200 ميكرولتر من العامل التجريبي المذاب في محلول ملحي. قم بتسمية هذه النقطة الزمنية لتطبيق الدواء في برنامج تحليل الاكتساب من خلال تضمين تعليق يتضمن الدواء والتركيز النهائي.