موسوعة JoVE للتجارب
Neuroscience
0 مشاهدة • 2:37 دقيقة • April 28th, 2025
ابدأ بقسم سميك من الدماغ تم تلطيخه بمحلول Golgi-Cox لتغميق الخلايا العصبية بشكل انتقائي وقابله باللون البنفسجي cresyl لتسليط الضوء على منطقة الدماغ.
ضعها على شريحة تمت معالجتها مسبقا بعامل مقاصة لتعزيز شفافية الأنسجة.
يتطابق زيت السيليكون مع معامل الانكسار للعدسة الموضوعية والشريحة ، مما يتيح التصوير التفصيلي.
ركز على العينة، ثم اضبط تعريض الكاميرا وتوازن اللون الأبيض للحصول على جودة الصورة المثلى.
ركز على الطبقة العليا لتعيين الحد العلوي، ثم على الطبقة السفلية لتعيين الحد السفلي.
اضبط التباعد بين الصور ذات التداخل الكافي لالتقاط تفاصيل الإسقاطات العصبية.
كرر التصوير في مواقع مختلفة لالتقاط مجالات الاهتمام، ثم قم بتراكب هذه الصور لإنشاء تمثيل ثلاثي الأبعاد للخلايا العصبية.
لالتقاط مجموعات صور عالية الدقة للمنطقة التي تحتوي على الخلايا العصبية ذات الأهمية ، حدد أولا هدف غمر زيت السيليكون 30x 1.05 NA على المجهر. ثم ضع 3 إلى 4 قطرات من زيت الغمر السيليكوني على الشريحة. ضع الهدف فوق الشريحة ، مما يضمن الاتصال بين الهدف والزيت. قم بتركيز الصورة واضبط إعدادات الكاميرا ، بما في ذلك التعريض الضوئي وتوازن اللون الأبيض في برنامج التصوير. بعد ذلك ، قم بتعيين الحدود العلوية والسفلية لمكدس الصور عن طريق التركيز على أعلى القسم ، ثم تحديد تعيين ، بجوار أعلى المكدس ، داخل نافذة الحصول على الصور.
ثم ركز على أسفل القسم وحدد تعيين بجوار أسفل المكدس. اضبط مسافة الخطوة على 1 ميكرون عن طريق إدخال 1 ميكرون بجوار المسافة بين الصور داخل نافذة الحصول على الصورة. أخيرا ، التقط مكدس الصور عن طريق تحديد اكتساب مكدس الصور داخل نافذة الحصول على الصور. كرر الخطوات السابقة لالتقاط منطقة الاهتمام بأكملها، مع التأكد من تداخل جميع مكدسات الصور بنسبة 10٪ على الأقل في المحورين x و y.