从小鼠后肢采集骨髓

— 骨髓是存在于骨骼中空腔内的海绵状胶状组织，含有造血干细胞，可生成作为免疫系统关键组分的血细胞。从股骨和胫骨等较大骨骼中分离骨髓可获得较高的细胞得率。

为获取骨髓，将已处死的小鼠置于仰卧位，并用乙醇对皮肤进行消毒。切开腹腔并去除皮肤以暴露后肢。折断腿部的长骨胫骨，并将其放入冷的磷酸盐缓冲液（PBS）中以维持生理条件。脱位膝关节并去除肌肉以暴露股骨（大腿骨）。

从骨骼底部切下股骨并置于冷 PBS 中。在小容量微量离心管上打一个小孔，将两根骨骼的开口端朝向小孔放入其中。将装有骨骼的管子放入一个大容量的离心管中，对双层管进行离心，以沉淀骨髓。收集的骨髓可用于后续分析。在本实验方案中，我们将从小鼠后肢中采集骨髓。

— 进行骨髓采集时，将一只6至10周龄的C57 black-6小鼠仰卧置于无菌手术垫上，并使用70%乙醇对腹部和后肢进行消毒。用解剖剪切开腹腔，并去除皮肤以暴露后肢。使用一对钝头敷料镊夹住小鼠胫骨踝关节稍上方位置，再用一对弯头敷料镊在钝头敷料镊下方固定胫骨。

使用钝头敷料镊子敲断胫骨并去除肌肉以暴露骨骼，随后将胫骨置于冷 PBS 中。将固定用的弯头敷料镊子移至股骨，再将钝头敷料镊子滑至膝关节下方以夹住髌骨。轻轻上提使髌骨脱位，并去除髌骨周围的肌肉以暴露股骨。用弯头敷料镊子夹住暴露的股骨，使用手术剪从骨底部剪断股骨，随后将股骨放入 PBS 中。

接下来，使用18号针头在0.5毫升微量离心管上打一个孔，将两根骨骼放入该管中，使骨骼的开口端朝下插入孔中。将0.5毫升的管子放入1.7毫升的微量离心管中，并将双层管置于微量离心机中离心。离心结束后，确认骨髓已完全被甩至管底。