骨髓来源树突状细胞的制备：一种从小鼠骨髓生成树突状细胞的方法

— 树突状细胞（DCs）是关键的抗原呈递细胞，能够激活T细胞。在白血病患者中，这些细胞对抗原相关肿瘤的表达水平较低，无法引发抗原特异性的免疫应答。树突状细胞在骨髓中含量丰富，因此骨髓是分离这些细胞的首选部位，有助于研究其在癌症中的作用。

为获得树突状细胞，使用含有培养基的注射器冲洗安乐死小鼠的股骨或胫骨，以提取骨髓。离心后，将沉淀重悬于氯化铵钾（ACK）缓冲液中，以裂解红细胞。随后加入培养基终止裂解反应，并进行离心。将沉淀重悬于含有抗生素的培养基中，加入粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF），然后将细胞悬液转移至培养皿中。

将培养板孵育所需的时间。GM-CSF 可促进前体细胞分化为树突状细胞。最后，用脂多糖（LPS）激活细胞，LPS 会结合树突状细胞表面受体，从而获得完全成熟且具有免疫原性的骨髓来源树突状细胞。在本实验方案中，我们将演示如何从小鼠骨髓中诱导生成树突状细胞。

— 为获得骨髓来源的树突状细胞，从小鼠股骨（如图所示，可使用野生型或因子B基因敲除小鼠）中分离骨髓，并在5毫升ACK裂解缓冲液中裂解红细胞，5分钟后加入10毫升含1% FBS的RPMI培养基终止反应。

离心收集全血细胞后，将沉淀重悬于10毫升培养基中，调整细胞浓度至2×10⁶个细胞/毫升，并向细胞中加入20纳克/毫升的GM-CSF，随后将10毫升细胞接种至各60毫米×15毫米的培养皿中，在37°C、5%二氧化碳条件下培养6天。第6天时，每孔加入25微克/毫升的LPS以激活骨髓来源的树突状细胞培养物。