阴性免疫磁珠分选：一种从外周血单个核细胞中纯化B细胞的方法

外周血单个核细胞（PBMCs）包括B细胞、T细胞、自然杀伤（NK）细胞和单核细胞。B细胞产生免疫球蛋白分子以抵抗感染。在白血病中，这些细胞会增殖并转移至不同器官。

为了分离B细胞，首先从分离的外周血单个核细胞（PBMC）悬液开始。加入针对称为分化簇（cluster of differentiation，CD）的特定细胞表面分子的一抗混合物。特异性抗体可结合T细胞上的CD-3分子、单核细胞上的CD-14分子以及自然杀伤（NK）细胞上的CD-16分子，从而使B细胞保持未标记状态。

接下来，洗涤样本以去除未结合的抗体。向样本中加入与磁性微珠偶联的二抗。二抗可结合至与特定细胞结合的一抗的Fc区。将含有标记细胞悬液的试管置于磁场作用下。在磁场中，被磁性标记的细胞迁移并结合到管壁上，从而实现对不需要的细胞的阴性筛选。收集含有富集B细胞的上清液至新的收集管中。

在本实验方案中，我们将从慢性淋巴细胞白血病患者的外周血单个核细胞（PBMC）中进行白血病性B细胞的阴性免疫磁珠分选。

弃去上清液，将一千万个外周血单个核细胞重悬于一毫升分离缓冲液中，该缓冲液为含0.1% BSA和2毫摩尔EDTA的PBS，pH值调节至7.4。现在需要从外周血单个核细胞制备物中纯化慢性淋巴细胞白血病淋巴细胞。然后加入10微克小鼠单克隆抗CD-3、CD-14和CD-16一抗，于4摄氏度孵育30分钟。

用分离缓冲液洗涤细胞后，在 4 摄氏度下以 500 × g 离心 5 分钟，将 1000 万个 PBMC 重悬于 1 毫升分离缓冲液中。将重悬的细胞与 100 微升洗涤后的磁珠在 4 摄氏度下孵育 30 分钟，期间轻柔地重悬细胞。然后将离心管置于磁力架上 2 分钟，用 5 毫升移液器将含有未结合细胞的上清液转移至新的离心管中。经过此步骤后，即可获得纯化的 CLL 淋巴细胞用于后续实验。