培养与分离形成荚膜的致病性细菌菌株

从分别培养在不同琼脂平板上的致病性细菌菌株开始。

每种菌株在负责产生荚膜（一种保护性多糖层）的基因中携带不同的突变。

将单个菌落从平板转移到含有营养丰富的液体培养基的独立试管中，并进行培养。

孵育期间，细菌进入指数生长期并表达产生荚膜的基因。

这些基因的突变会导致荚膜产生量的差异，从而生成无荚膜、弱荚膜和强荚膜细胞。

转移培养物并进行离心，使细胞沉淀成团。

无荚膜和弱荚膜细胞形成致密的沉淀，而强荚膜细胞则不形成。

由于其水合的荚膜层，形成的沉淀物密度较低。

小心移除上清液，避免丢失具有浓厚荚膜的细胞。

加入缓冲液，再次离心，弃去上清液以去除残留的培养基。

将细胞重悬于缓冲液中，以稳定细菌而不促进其进一步生长，从而保持荚膜结构。

用无菌接种环从保存用平板上挑取单个菌落，并接种于10毫升适当的液体培养基中。

将培养物在过夜培养。然后将培养物转移至15毫升离心管中，离心。接着弃去上清液，并将沉淀重悬于2毫升磷酸盐缓冲液（PBS）中。

重复离心，弃去上清液。然后将沉淀重悬于 2 mL 磷酸盐缓冲液（PBS）中。