相差显微镜用于评估发育突变体 链霉菌属

从含有天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor）野生型和突变株菌落的琼脂平板开始，该菌是一种丝状土壤细菌。

在菌落密集生长且气生菌丝（即延伸至菌落表面以上的菌丝）清晰可见的区域上，放置一片无菌盖玻片。

轻轻按压盖玻片，将气生菌丝及其相关孢子转移至盖玻片表面。

接下来，取一张带有封片剂的显微镜载玻片，将盖玻片细胞面朝下封固，以保存细菌结构。

将玻片置于显微镜载物台上，在盖玻片上滴加一滴浸油，并对准物镜。

利用相差显微镜，获取野生型和突变株的气生菌丝图像。

野生型菌丝表现出大小均匀、间距规则的孢子。

相比之下，突变株表现出缺陷，例如菌丝膨大、孢子不规则或孢子裂解，揭示了野生型与突变株之间在发育表型上的差异。

为制备细菌生长的盖玻片提升样本，使用无菌镊子夹取一片无菌盖玻片，将其放置于细菌生长密集的MS琼脂平板上。用镊子轻轻按压盖玻片背面，以确保足量的细菌孢子和气生菌丝被转移至盖玻片表面。从平板上取下盖玻片，将其以45度角放置，使附有细胞材料的一面朝向载玻片表面，载玻片上预先滴加一滴15微升的50%甘油溶液。

让盖玻片自然下落至甘油上，以减少气泡产生。若需在不同时间点进行相差显微镜观察，请将制备好的玻片置于显微镜载物台上，并在盖玻片中央滴加一滴镜油。旋转至100倍相差物镜位置，并将聚光镜转盘调整至相应的匹配相差档位。

当物镜与镜油接触后，仅使用细调焦旋钮来聚焦图像。应观察多个视野，以辨别突变株与野生型之间明显且一致的差异，例如形成孢子的能力、孢子的大小和形状以及孢子的总体数量。