Staphylococcus aureus 中的感受态诱导 DNA 摄取

取一株对氯霉素敏感的S. aureus菌种。

离心以沉淀细菌，并移除上清液。

将菌体沉淀转移至含有营养限制培养基的离心管中并进行培养。营养胁迫可增强细菌的感受态——即细菌吸收外源DNA的能力。

再次离心，弃去上清液。用新鲜的营养限制培养基重悬沉淀。

接着，加入从携带氯霉素抗性基因的S. aureus菌株中提取的DNA。孵育。

DNA摄取机制将DNA加工成单链，并将其转运至细胞质，在那里整合到细菌染色体中。

离心并去除上清液。将沉淀重悬于营养丰富的培养基中。

将悬浮液转移至含有氯霉素的熔融营养琼脂中。

将混合物倒入培养皿中并进行孵育。

氯霉素抗性菌落的生长表明DNA成功被吸收。

将受体菌在 37 摄氏度、5 毫升 TSB 培养基中振荡培养过夜。次日早晨，取 0.5 毫升过夜培养物转移至 1.5 毫升离心管中。

通过离心沉淀细胞。然后在50毫升离心管中用10毫升CS2培养基重悬细胞。随后在37°C、180转/分钟振荡条件下培养细菌8小时，直至达到对数生长后期。

通过离心收集细胞。弃去上清液，并将细胞重悬于10毫升新鲜CS2培养基中。向细胞悬液中加入10微克纯化的质粒或基因组DNA。

以每分钟180转的速度振荡培养物。然后通过离心收集细胞。将细胞重悬于10毫升BHI培养基中。

将细胞悬液与90毫升已融化并添加了32毫克/升氯霉素和5微克/升四环素的BHI琼脂混合（对照实验）。将混合物倒入90毫米的培养皿中，迅速冷却并使琼脂凝固。使用牙签将菌落转移至含有相应抗生素的平板上进行复制培养，以确认其抗性特征。