海洋发光细菌中发光操纵子的表达

0 次观看2:14 分钟 • September 26th, 2025

从携带发光操纵子的海洋生物发光细菌菌株开始,该操纵子编码荧光素酶及底物合成所需的酶。

在富含营养的琼脂平板上划线接种该菌株,并添加人工海水以模拟其天然盐度,促进其生长。

孵育以获得单菌落,然后挑取单个菌落并接种于含人工海水的液体培养基中。

在振荡条件下孵育,以促进过夜培养中处于指数生长期的生长。

将过夜培养物的确定体积转移至新鲜培养基中,并进行孵育以增加细菌密度。

随着种群扩增,细菌会释放自诱导剂,这些信号分子不断积累并扩散进入细胞,与细胞内受体结合,从而激活发光操纵子。

这种激活会诱导荧光素酶的表达以及底物的生物合成。

荧光素酶催化底物氧化,发出蓝绿色光。

通过监测培养物的生物发光情况,作为海洋细菌中发光操纵子激活及发光现象的指示。

根据文本方案配制培养基后,将细菌发光菌株划线接种于人工海水培养基琼脂平板上,并在24至30摄氏度下培养过夜。

通过从平板上挑取单菌落接种至100毫升人工海水培养基中,制备过夜培养物。随后在24至30摄氏度、120转/分钟的条件下过夜培养。次日,取8毫升过夜培养物接种至800毫升人工海水培养基中。

将细菌细胞在 24 至 30 摄氏度、120 RPM 条件下培养,并观察细胞直至其开始发光。