利用非离子型去污剂相分离富集细菌脂蛋白

取含有亲水性蛋白质、脂蛋白和蛋白质聚集体的细菌裂解液。

加入一种在较高温度下能够发生相分离的冷态非离子型去污剂。

冰上孵育，并定期混匀。去垢剂会结合脂蛋白的脂质部分，形成蛋白质-去垢剂复合物。

加热混合物以诱导相分离。脂蛋白富集于去垢剂相中，而亲水性蛋白质则保留在水相中。

在室温下离心，以维持两相分离状态。

弃去水相，向去垢剂相中加入冷缓冲液并混匀。

重复冷却、复温及离心循环，以富集脂蛋白。

然后，加入冷缓冲液并在低温下离心，以沉淀非脂蛋白聚集体。

将上清液转移至含有蛋白质沉淀溶剂的离心管中，并在零下温度下孵育，以沉淀脂蛋白。

在室温下离心，并弃去上清液。

沉淀的脂蛋白可用于后续研究。

向离心上清液中加入冰冻的4% TX-114表面活性剂溶液，使终浓度为2%（加入体积与上清液体积相等）。将添加了表面活性剂的上清液置于冰上孵育1小时，每15分钟颠倒混匀一次。随后将离心管转移至37摄氏度水浴中，孵育10分钟以诱导相分离。

在室温下以10,000 × g离心样品10分钟，以维持两相分离。小心吸取上层水相并弃去。向下层表面活性剂相中加入预冷的TBSE，补足至原体积，倒置混匀。

冰上孵育10分钟。孵育结束后，将离心管转移至37摄氏度水浴中孵育10分钟以诱导相分离，然后在室温下以10,000 × g离心10分钟。重复上述步骤一次，共进行三次分离，之后移除上层水相并弃去。

向表面活性剂相中加入一体积预冷的冰TBSE，以去除提取过程中形成的沉淀蛋白质颗粒。在4摄氏度、16,000 ×g 条件下离心2分钟，使不溶性蛋白质沉淀。立即将上清液转移至含有1,250微升100%丙酮的新的2.0毫升微量离心管中。

通过倒置混匀样品，并在 -20 摄氏度下孵育过夜以沉淀蛋白质。次日，在室温下以 16,000 × g 离心 20 分钟，使脂蛋白形成沉淀，注意离心管的方向。用 100% 丙酮洗涤沉淀物两次，然后倾去丙酮，让样品自然风干。

然后，加入 20 至 40 微升 10 毫摩尔/升 Tris-HCl（pH 8.0），并用移液器反复吹打管壁，使沉淀的脂蛋白充分重悬。