评估有益细菌对热应激大鼠肠道微生物易位的影响

从一只预先用有益细菌处理的实验大鼠和一只给予磷酸盐缓冲液（PBS）的对照大鼠开始。

将两只大鼠暴露于高温环境以诱导生理应激。

在对照组大鼠中，热应激会破坏肠道上皮屏障，导致肠道源性细菌易位并扩散至内脏器官。

然而，在实验大鼠中，有益细菌会释放信号分子，以维持上皮连接并减少细菌移位。

取出每只大鼠的已收获肝脏样本所存放的试管。

加入 PBS 并将样品匀浆以释放细菌到缓冲液中。

将稀释后的匀浆液涂抹在营养丰富的琼脂平板上。

孵育平板以使细菌菌落形成，然后计数菌落。

对照样品中较高的菌落数表明肠道屏障受损及细菌移位。

相比之下，实验样本中菌落数量较少表明有益细菌在限制细菌向肠道移位方面具有作用。

用 B.subtilis BSB3 或 PBS 经口灌胃处理大鼠两天后，将动物分组并测量体温，将第一组和第二组大鼠置于室温下 25 分钟。将第三组和第四组动物置于 45 摄氏度、相对湿度 55% 的气候室中 25 分钟。

然后，在处死动物、采集躯干血并根据文本方案分离器官后，向每支试管中加入无菌 PBS，使样品按重量体积比稀释至 1:10，并使用无菌玻璃组织匀浆器制备均匀的组织悬液。

接下来，使用无菌 PBS 对每个样本进行连续稀释。然后，取所有稀释液各 0.1 毫升，涂布于麦康凯琼脂、5% 血琼脂以及含血红素和维生素 K1 的布鲁氏菌血琼脂平板表面。培养平板后，使用菌落计数器对每组平板上的菌落进行计数。