评估细菌疫苗抗原结构完整性的蛋白质印迹法

取一块含有膜蛋白-纳米脂蛋白颗粒蛋白质条带的SDS-PAGE凝胶。这些复合物携带 沙眼衣原体 寡聚膜蛋白或MP，一种有前景的疫苗抗原 沙眼衣原体 感染

使用纯化的寡聚 MP 蛋白条带作为对照。

在干式转膜系统中组装凝胶、蛋白质印迹膜和转膜组件。

施加电流将分离的蛋白质转移到膜上。

取出膜，并将其在含有去污剂和一抗的缓冲液中孵育。

洗涤剂可阻断非特异性结合位点，而一抗则靶向MP。

洗涤膜以去除未结合的一抗。

使用针对一抗的荧光染料标记的二抗进行孵育。

洗涤膜以去除过量的二抗。

捕获膜的荧光图像。

与对照寡聚化膜蛋白（MP）匹配的分子条带证实了复合物中MP的结构完整性，支持其抗原潜力。

通过SDS-PAGE分离样品，并使用商用干式转膜系统将凝胶叠层转移，用于Western blot分析。将膜从叠层中取出，置于含有0.2% TWEEN 20以及0.5 微克/毫升 MAb40 或 0.2 微克/毫升 MAbHIS 抗HIS标签抗体（靶向delta-49ApoA1蛋白的HIS标签）的封闭缓冲液中，于4摄氏度孵育过夜。

用PBST洗涤每张印迹膜，每次五分钟，共洗涤三次。将印迹膜置于含荧光染料标记的二抗（按1:10,000稀释）的封闭缓冲液中孵育一小时。最后一次洗涤后，再次用PBST重复洗涤，然后使用荧光成像仪捕获图像。