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微生物学
0 次观看 • 2:45 分钟 • November 28th, 2025
从含有C. elegans线虫的试管开始。
将线虫转移至含对照细菌或待测细菌的富含营养的琼脂糖培养基多孔板中。
孵育期间，线虫摄取细菌，细菌定植于肠道上皮并释放氨基酸，作为营养来源。这些氨基酸被代谢为氨基酸衍生物，并储存在与溶酶体相关的肠道颗粒中。
接下来，加入新鲜缓冲液，并将线虫转移至黑色多孔检测板中。
向每个孔中加入化学应激诱导剂，并密封培养板。
将培养皿放入荧光酶标仪中，并记录荧光信号。
在蠕虫中，应激诱导剂会引起氧化应激，从而损伤肠道上皮细胞。
这会导致与溶酶体相关的肠道颗粒破裂，释放出氨基酸衍生物，这些衍生物在紫外光照射下会发出蓝色荧光。
通过比较线虫在对照细菌和待测细菌暴露下的荧光强度，评估细菌定植效率及其对宿主氧化应激反应的影响。
在15毫升锥形管中将线虫浓度调整为每微升15只线虫。然后，使用多通道移液器或重复移液器，将8微升线虫溶液分别加入八个96孔NGM琼脂糖板的每个孔中。
36 小时后，向 96 孔板的每个孔中加入 30 微升 M9。接着，使用低吸附枪头按照设定的布局将线虫转移至 384 孔板中，并确保正确设置酶标仪。随后，向 384 孔板中补加 M9，使每孔终体积达到 60 微升：进行热应激实验时，每孔补加 40 微升 M9；进行 TBHP 诱导的氧化应激实验时，每孔加入含 6 微升 TBHP 的 34 微升 M9。
加入TBHP后两分钟内开始检测。接着，用透明盖盖紧板孔，再用封口胶带密封384孔板的边缘，注意胶带不要覆盖盖子或伸入板底。然后，将板插入酶标仪中。