基于液相色谱-质谱联用技术的代谢物分析方法 S. aureus

以悬浮于含有二氧化硅珠的淬灭溶液中的Staphylococcus aureus开始，于低温保存以维持其代谢状态。

在低温条件下匀浆细菌，以释放胞内成分，同时尽量减少代谢物的酶降解。

离心裂解液，收集富含代谢物的上清液。

向提取物中加入有机溶剂，涡旋以使大分子从可溶性代谢物中沉淀出来。

离心以沉淀析出物，并将上清液转移至小瓶中。

将小瓶装入液相色谱-质谱联用系统中。

在色谱柱内，代谢物根据其化学性质与固相固定相发生相互作用。

加入缓冲液以洗脱代谢物，随后将代谢物导入质谱仪的电喷雾离子化源进行离子化。

然后根据离子的质荷比对其进行分离。

将获得的数据与参考数据库进行比对，以鉴定代谢物。

开始代谢物提取时，首先将样品置于湿冰上解冻。然后使用匀浆器以6000 rpm的转速进行四次30秒的破碎，每次破碎间隔在干冰上冷却两分钟。

在预冷的微量离心管中，以最大转速离心15分钟，澄清裂解液。离心后，将上清液转移至新的洁净微量离心管中。使用微量移液器，取少量样品转移至另一微量离心管中，用于按照文中的实验方案定量残留肽含量。

将剩余样品储存在 -80 摄氏度。有关通过液相色谱和质谱分析代谢物的步骤，请参考文字方案。