秀丽隐杆线虫相关细菌的分离与培养

从一块多孔板开始，每孔中含有无菌珠和缓冲液。

向每个孔中加入一株C. elegans线虫，以分离其细菌群落。

使用匀浆器通过机械方式破碎线虫，使细菌释放到缓冲液中。

离心以分离细胞碎片，并收集含有细菌的上清液。

将稀释后的细菌溶液接种到不同成分的选择性营养琼脂平板上，以支持多种类型细菌的生长。

孵育平板，使细菌增殖并形成可见的菌落。

使用无菌接种环挑取一个孤立的单菌落，并将其划线接种到相同培养基的新培养皿上。

孵育平板，以促进纯细菌菌落的生长。

将每个纯菌落接种到相应的液体培养基中，并进行培养。

这些细菌可生长为纯培养物，每种均代表一种自然相关的细菌物种 秀丽隐杆线虫.

为了分离细菌，准备一个96孔板，每孔中加入约三个无菌的1毫米珠子和20微升M9缓冲液，并用移液器将单个洗涤后的线虫尽可能少地带液转移至各孔中。使用珠磨匀浆器按照之前演示的方法裂解线虫，随后短暂离心平板使液体沉降至孔底。完成后，收集悬浮液，并以1:10的比例进行连续梯度稀释。

将稀释后的菌悬液最多100微升涂布于9厘米的琼脂平板上。随后在15至20摄氏度下培养24至48小时。为获得纯细菌培养物，使用无菌接种环或无菌牙签从培养后的平板上挑取单个菌落，并将其划线接种至新的含有相同琼脂培养基的平板上。注意仅使用平板的三分之一区域。

然后，对可重复使用的接种环进行灭菌，或使用新的无菌接种环，将其穿过第一道划线区域，在样品平板的另外三分之一区域划出第二道线。再将接种环穿过第二道划线区域，划出第三道线，以获得单菌落生长。

将培养皿置于与分离时相同的生长条件下培养，如有需要，可重复纯化步骤。使用相同的温度和生长条件，在液体培养基中培养纯菌落。