细菌暴露后对 C. elegans 肠道通透性的评估

在对照条件下，取在含有E. coli的营养丰富的琼脂平板上培养的C. elegans线虫；在病原体条件下，取在含有铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）的琼脂平板上培养的线虫。

孵育期间，线虫以定植于肠腔内的细菌为食。

在对照组中，肠上皮保持完整，而病原体释放的毒素导致上皮损伤。

用缓冲液清洗线虫，并转移至添加了荧光示踪剂和热灭活细菌作为食物来源的培养板中。

在对照组中，摄入的荧光示踪剂保留在肠道内；而在病原体感染的线虫中，这些示踪剂会穿过受损的上皮组织进入体腔。

再次清洗线虫，并将其放置于新鲜的培养板上。然后将它们转移到含有固定剂的多孔检测板中，以保存细胞结构。

去除固定剂，然后加入封片剂用于成像。

使用荧光成像系统进行观察。

P. aeruginosa 感染的线虫体腔内荧光增强，表明病原体诱导了肠道通透性增加。

用 S 缓冲液洗涤同步化年龄的 L4 幼虫，并将约 500 条线虫转移至含有不同细菌和化学物质的 NGM 平板上。随后，将平板在 20 摄氏度下孵育 48 小时。

通过将 2 毫升热灭活的大肠杆菌（E. coli）与 4 毫克 FITC-葡聚糖混合，制备添加 FITC-葡聚糖的平板。将 100 微升该混合物加入 20 个新的 NGM 琼脂平板中，置于洁净的实验台上干燥 1 小时。处理 48 小时后，用 S 缓冲液清洗线虫，将其转移至添加 FITC-葡聚糖的平板以及不含 FITC-葡聚糖的 NGM 平板中，并在其中过夜培养。

第二天，用 S 缓冲液清洗线虫，并将其转移至新鲜的 NGM 琼脂平板上爬行 1 小时。向黑色 96 孔平底板的每个孔中加入 50 微升 4% 多聚甲醛，然后将约 50 条线虫转移至各孔中。1 至 2 分钟后，吸除所有多聚甲醛，并向每个孔中加入 100 微升封片介质。