利用聚合酶链式反应检测二元培养物中的糖单胞菌

0 次观看2:06 分钟 • February 26th, 2026

从一株感染了 Saccharibacteria 的 Actinomyces 培养物开始。

放线菌门细菌(Saccharibacteria),一种超小型寄生细菌,与其宿主形成二元培养体系。

将感染培养物的等分试样加入含有扩增试剂、电泳示踪染料和特异性针对Saccharibacteria的引物的PCR管中。

将试管放入设定好PCR程序的热循环仪中。

初始变性过程中,加热使共生菌裂解,释放基因组DNA。放线菌由于细胞壁坚固而保持完整,从而限制了宿主DNA的释放。

随后,热量使 Saccharibacteria 的 DNA 链变性,并激活 Taq DNA 聚合酶。

在退火过程中,引物会结合到 Saccharibacteria 基因组中的互补序列上。

延伸过程中,Taq DNA聚合酶将dNTPs添加到引物上,合成新的DNA链。

将扩增的PCR产物加样到预先用可结合DNA片段的染料染色的琼脂糖凝胶上。

进行电泳,并在紫外光下观察凝胶。

一条特定于 Saccharibacteria 的扩增子条带证实了二元培养物中的宿主-寄生相互作用。

取24微升PCR预混液加入到0.2毫升PCR管中。加入1微升感染了梭杆菌的培养物,将PCR管放入热循环仪中。

按照文稿中描述的程序设置PCR反应。将PCR产物上样并在1%琼脂糖凝胶上电泳。约600个碱基的条带可证实唾液菌的存在。