原子力显微镜观察噬菌体-抗原相互作用

取一片解理的云母表面，作为纳米级成像的平整基底。
将目标抗原加入云母表面。孵育以使抗原通过非共价作用结合至云母表面。
用水洗涤以去除未结合的抗原。
加入含有展示不同抗体片段克隆的噬菌体混合物，并进行孵育。
抗原特异性的噬菌体通过其展示的抗体片段与固定的抗原结合。
洗涤以仅保留高亲和力的噬菌体相互作用。空气干燥以稳定复合物。
将样品置于轻敲模式原子力显微镜（AFM）下。
将激光束对准带有纳米级探针的悬臂，并启动扫描。
探针振荡并轻敲云母表面。结合的噬菌体颗粒引起高度变化，导致悬臂偏转，从而使反射的激光束发生位移。
该位移由光电探测器检测，生成高分辨率的形貌图像。
在这些图像中，噬菌体呈现为长而明亮的结构，表明噬菌体–抗原相互作用。
为利用AFM可视化噬菌体结合，向解理的云母表面加入10至20微升目标抗原，孵育5至10分钟。用纯水洗涤云母五次。随后，向云母表面加入10至20微升噬菌体，孵育5至10分钟。再次用纯水洗涤云母五次，并使其自然风干。
在室温空气中使用Nanoscope IIIa控制器执行AFM成像，采用轻敲模式。硅基AFM探针的共振频率为300千赫兹，弹性常数为40牛顿每米。将AFM探针插入探针装载器中。将探针装载器连接至AFM显微镜。
将样品置于AFM显微镜下。使用调节旋钮将激光对准AFM探针。
设置扫描速率为3.05赫兹，扫描分辨率为每行512个采样点。自动调谐仪器以优化探针的二氧化硅振动频率。开始样品扫描。
探针将扫描云母表面，测量结合噬菌体的高度。噬菌体表现为长的白色线条