细菌细胞染色及免疫学研究样品制备

从含有处于对数生长期细菌培养物的试管开始，确保细菌生长均匀且活跃，以获得一致的实验结果。

离心收集细胞；吸除含有碎片的上清液，并重悬细胞。

引入一种可穿透细胞的红色荧光染料。染料分子可穿透细菌细胞膜并到达拟核，与DNA结合，使细菌呈现红色荧光。

离心以沉淀染色的细菌，并吸除含有未结合染料的上清液。

将细菌重悬于培养基中以维持细胞活性。

使用光度计，在600纳米处测定稀释后细菌悬液的吸光度。

将吸光度值与标准曲线进行比较，以确定细菌浓度。

将适量染色的细菌悬液转移至含有培养基的新离心管中，以获得用于感染宿主细胞所需的细菌浓度，即感染复数（multiplicity of infection，MOI）。

具有理想感染复数（MOI）的染色细菌已准备好用于免疫学研究。

首先，通过在13,000 × g条件下离心收集处于对数生长期的细菌培养物 g 在室温下孵育两分钟。用一毫升 PBS 洗涤菌体沉淀后，将菌体沉淀重悬于一毫升 PBS 中。

通过测量600纳米处的光密度来确定细菌悬液的浓度。然后，为了染色细菌悬液，将两微升500倍浓缩的绿色或红色染色染料原液加入一毫升细菌悬液中，使染料稀释一倍。将细胞在室温下避光、轻轻旋转孵育30分钟。

孵育30分钟后，在13,000 × g 条件下离心2分钟，沉淀染色后的细菌，并将菌体沉淀重悬于1毫升磷酸盐缓冲液（PBS）中。通过在13,000 × g 条件下离心2分钟收集染色的细菌细胞。将菌体沉淀重悬于1毫升新鲜F-12K培养基中，并在600纳米波长下测定各菌液的光密度。随后根据感染复数（MOI）和宿主细胞浓度，将菌液稀释至所需浓度。