一种延长视网膜神经组织孵育时间的技术

在人工脑脊液（aCSF）中取一个完整的小鼠眼球，切开以分离出含有视网膜的巩膜杯。

使用酶溶液处理以去除内界膜，暴露神经元细胞。

将组织浸入抑制溶液中以终止消化，并进行洗涤以去除多余的溶液。

将组织置于低温的专用培养箱中，以减缓细胞代谢，从而保存组织。

该培养箱包含一个带有网架以用于固定组织的主腔室。腔室内充满aCSF，且其温度和pH值受到控制，以维持组织功能。

为了消除微生物污染，将 aCSF 泵入另一个腔室，并通过紫外线辐射处理以杀灭所有微生物。

然后将灭菌的 aCSF 泵回主腔室。

为了分离视网膜，先移除眼杯，将视网膜从周围组织中分离，然后将其放回培养箱中。

进行视网膜铺片制备时，立即摘除安乐死动物的眼球。沿锯齿缘做一小切口，并将眼球置于含碳合气体供应的Ames培养基或aCSF中，室温保存。随后，立即用小剪刀沿锯齿缘剪除角膜、晶状体和玻璃体，并用镊子将其移除。将组织置于室温下的孵育系统中。

为去除内界膜，将含有视网膜的眼杯转移至含有木瓜蛋白酶、L-半胱氨酸、EDTA 和 DNA酶的小玻璃瓶中，在 37 摄氏度下孵育 20 分钟。通过瓶盖向溶液中通入碳氧混合气（carbogen），但不要产生气泡。将组织置于含卵黏蛋白和牛血清白蛋白（BSA）的 Earle 平衡盐溶液（Earl's BSS）中孵育 10 分钟，以终止酶消化反应。随后，用人工脑脊液（aCSF）充分洗涤组织。

随后，将组织转移至孵育系统，并将温度降低至约 15 至 16 摄氏度。接着，将视网膜组织转移至显微镜下；从眼杯中分离视网膜，并用刀片将其切成四片。如果需要完整的视网膜，可在视网膜周边做四个小切口，以使其平铺展开。

现在可将该组织转移至显微镜下进行电生理实验，或将其保留在脑片孵育器（Braincubator）中。组织保存在主腔室中，该腔室包含用于pH值和温度测量的探针。第二个腔室与主腔室隔离，并暴露于1.1瓦特的UVC光照下，以辐照溶液中悬浮的细菌。使用蠕动泵使人工脑脊液（aCSF）在两个腔室之间循环，并利用帕尔贴热电制冷板对主腔室进行冷却或加热。