一种用于模拟神经元-少突胶质细胞相互作用的共培养方法

取培养在细胞外基质上的人源诱导性神经元（iNs）。

移除培养基，并加入可破坏基质的消化酶，使细胞解离。

将iNs转移至离心管中。离心悬浮液，弃去含有酶的上清液。

用共培养基重悬iNs，并将其转移至诱导的少突胶质前体细胞（iOPCs）培养物中。

iOPC 是少突胶质细胞的前体细胞，能够围绕神经元轴突形成髓鞘。

经过孵育后，诱导少突胶质前体细胞（iOPCs）会与诱导神经元细胞（iNs）形成突触连接。iOPCs释放的营养因子以及培养基中的生长因子促进iNs向神经元的成熟，表现为细胞突起增多，并与其他神经元形成突触连接。

成熟神经元的电活动以及培养基中的生长因子可诱导iOPC成熟为少突胶质细胞。

少突胶质细胞延伸出细胞突起，在神经元轴突周围形成髓鞘。

已建立的共培养体系可进行分析。

第14天，在24孔板中，以每孔1 × 10⁵个细胞的密度，将iOPC接种于OPC分化培养基中。次日，使用细胞解离溶液将诱导的人类神经元解离，并将其接种至培养的OPC上，接种密度为每孔2 × 10⁵个细胞。使用共培养培养基，其中包含Neurobasal A培养基、2% B-27补充剂以及100纳克/毫升T3三碘甲腺原氨酸。次日更换培养基，之后每隔一天更换一次。若OPC增殖过快，在少于三天内达到汇合状态，则加入2至5微摩尔的Ara-C。