通过短暂的DMSO处理增强干细胞分化

从一个含有已贴壁的人多能干细胞的多孔板开始，这些细胞具有多向分化潜能。 

加入含有二甲基亚砜（DMSO）的干细胞培养基。

DMSO 进入细胞，并阻止细胞周期从间隙期1（G1期）——细胞周期的初始阶段——进展到合成期（S期）。

这会在G1期形成均一的细胞群体，增强其分化能力。

用含有 BMP 和 TGF-β 信号通路抑制剂的营养丰富的外胚层分化培养基替换原有培养基。

这些抑制剂结合到干细胞上的特异性 ALK 受体，阻断 BMP 和 TGF-β 信号通路，从而抑制其向内胚层和中胚层前体细胞的分化。

这使得G1期阻滞的干细胞能够选择性地分化为具有神经分化能力的外胚层前体细胞。

定期更换新鲜培养基，以维持营养物质和分化因子的水平，确保细胞存活。

按照2D培养所述方法，用DMSO预处理细胞，并配制Noggin和SP431542的储存液。准备足够的10%无血清替代物（knockout serum replacement）或KOSR溶于knockout DMEM的培养基，以满足三至四天的换液需求。根据文献所述方法，将Noggin和SP431542加入预热的含KOSR的knockout DMEM中，配制外胚层分化培养基。

经DMSO预处理后，吸除细胞中的培养基，每孔加入2毫升分化培养基。将细胞置于二氧化碳培养箱中，在37摄氏度下孵育3至4天，每天更换新鲜的分化因子培养基。