制备微图形化基底以研究施万细胞表型

取一块带有特定几何形状微图案的硅片，用于在确定的形状下培养细胞。

将聚合物混合物倒入其上，并使其固化。

用聚合物切割出一个方形印章。

用一层促进细胞贴附的蛋白质包被印章的图案表面。

使用气流去除未结合的蛋白质。

取一个聚合物涂层的盖玻片。

将印章的图案面朝下放置。

按压印模以转移图案。移除印模。

将盖玻片转移至含有表面活性剂的孔中，以包被裸露的表面。这会增加表面疏水性，防止细胞非特异性黏附。

去除表面活性剂，并用磷酸盐缓冲液洗涤。

加入施万细胞，并使其附着于微图案上。

用缓冲液洗涤以去除未贴壁的细胞。

加入培养基并孵育。

随着细胞在表面生长，它们会呈现微图案的形状，从而能够研究施万细胞的表型。

为制备微图案化基底，将一块带有图案的硅晶圆放入一个直径150毫米、高15毫米的圆形培养皿中，并将脱气的PDMS倒入晶圆上。在60摄氏度的烘箱中过夜固化PDMS。待PDMS冷却至室温后，使用外科手术刀切割出包含正确图案的30毫米×30毫米正方形印章，注意不要损坏硅晶圆。将PDMS印章和可调盖玻片浸入70%乙醇中30分钟以进行灭菌。

为确认微图案的效果，使用过滤的气流吹干PDMS印章的表面，并用移液枪吸取50微克/毫升的BSA溶液，覆盖印章的整个图案面。在室温下将印章与BSA溶液孵育1小时，使蛋白质充分吸附，随后将印章空气干燥以去除BSA溶液。使用过滤的气流吹干可调载玻片的表面。

将印章的图案面与可调节的盖玻片进行紧密贴合，使BSA在盖玻片表面吸附，然后轻轻将印章压在盖玻片上5分钟。使用配备FITC滤光片的荧光显微镜观察微米级图案。若要打印细胞黏附区域而非荧光图案，可用层粘连蛋白（laminin）替代BSA蛋白。

将印章从盖玻片上取下，然后将盖玻片转移至已灭菌的6孔板中。每孔加入2毫升0.2% Pluronic F127溶液，确保溶液覆盖盖玻片表面，并在室温下孵育1小时。吸除F127溶液，用PBS洗涤盖玻片5次，再用细胞培养基洗涤1次，随后以每平方厘米1,000个细胞的接种密度接种施万细胞。细胞接种45分钟后，移除细胞培养基，并用PBS洗涤盖玻片两次，以防止多个细胞黏附于同一图案区域。在定量分析前，将细胞置于所需的细胞培养环境中培养48小时。