使用荧光激活细胞核分选技术从脑组织中分离细胞群体

将一块新鲜冷冻的人类脑组织转移至含有冷裂解缓冲液的合适研磨器中。

上下移动研杵，通过机械作用破碎组织，释放细胞。

裂解缓冲液中的去污剂分子可破坏细胞膜，释放出细胞核。

将内容转移至合适的离心管中，并将冰冷的蔗糖缓冲液加入管底，形成密度梯度。

高速离心，使细胞核沉淀至管底。

弃去上清液，并将细胞核重悬于缓冲盐溶液中。

向细胞核中加入靶向特异性的荧光素偶联抗体，并孵育以使抗体与其靶核蛋白结合。

加入细胞核染色染料以观察完整的DNA。

通过荧光激活核分选技术，根据不同荧光信号对不同细胞群体的细胞核进行分选。

从新鲜的冷冻人成年大脑皮层组织样本中，开始解剖约200至400毫克的组织。将组织置于一个7毫升的玻璃匀浆器中，加入4毫升预冷的裂解缓冲液，并将匀浆器置于冰上，匀浆约50次。

将匀浆转移至一个12毫升的超速离心聚丙烯管中。使用5毫升移液器将6.5毫升预冷的蔗糖缓冲液加入超速离心管底部，注意不要扰动蔗糖与组织匀浆之间的界面。

为收集细胞核，将裂解液在101,814 × g 条件下超速离心一小时 克， 小心吸除上清液及碎片，切勿扰动沉淀。向超速离心管中加入 PBS，重悬细胞核沉淀。

对于分离细胞核的荧光激活分选，取约20微升重悬的样品加入含有AlexaFluor555标记的小鼠抗NeuN抗体的抗体溶液中。另取约20微升重悬的样品加入含有APC标记的小鼠抗PAX6抗体的抗体溶液中。在4摄氏度避光振荡孵育一小时后，以1:1,000的比例向所有样品和对照中加入DAPI。